2020-04-20 11:00:17, 麦特绘谱 麦特绘谱生物科技(上海)有限公司
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2020年3月25日绘谱学堂第五期公开课--《菌群代谢物-胆汁酸调控与功能机制》由麦特绘谱资深技术支持王洋博士主讲,本期公开课结合麦特绘谱技术团队十几年胆汁酸相关研究经验,同大家一起探讨胆汁酸体内代谢过程,胆汁酸作为信号因子或代谢调节因子通过何种信号通路与肠道菌相互作用影响疾病的发生和发展,并分享胆汁酸研究中的注意事项。本期参加课程的老师和同学们认真听讲并踊跃提问与交流。在此,小编特别整理了一份课后Q&A分享给大家,以便您随时温习查阅。
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Q&A
Q1. 血清,粪便或者结肠内容物中胆汁酸测定是采用质谱还是试剂盒?
A1:目前采用质谱检测胆汁酸种类更多且定量更微量,相比试剂盒更准确。
Q2. 胆汁酸可以检测到多少种?有多少胆汁酸的生理功能已知的?人或者小鼠的胆汁酸大概有多少种?
A2:麦特绘谱研发团队开发出采用同位素标准品绝对定量60+种胆汁酸,人/鼠不同样本检测出的胆汁酸种类有所区别,大概可以分别检出30-40种左右。目前研究比较多的是LCA、DCA、CDCA等等,不过过去胆汁酸的检测种类少,含量低的胆汁酸难被仪器捕捉到,且很多胆汁酸生理功能不是很清楚,值得各位老师进一步做功能验证。
Q3. Q300代谢芯片能检测出多少个胆汁酸?目前哪种方法检测胆汁酸比较全面?
A3:目前麦特绘谱检测胆汁酸的方案比较多,包括Q300代谢芯片、宏代谢、胆汁酸谱旗舰版、胆汁酸基础版、胆汁酸临床版。Q300包含30种左右常规胆汁酸,它更大的作用是可以同时检测到其他代谢物类群,如脂肪酸、氨基酸、糖类,看到的范围更广;宏代谢是针对200种左右菌群相关代谢物绝对定量检测,包含了30种左右胆汁酸;胆汁酸谱旗舰版可检测60+种胆汁酸,是目前最全的检测方法;胆汁酸基础版和胆汁酸临床版是分别针对动物实验和临床开发的针对20+种胆汁酸进行绝对定量检测。不同方案可根据自己的研究目的进行选择。
Q4. 进行胆汁酸研究时,粪便应该收集多长时间为好?胆汁酸体外是否稳定?
A4:粪便收集分为两种,一种是肠内容物,可以按照肠段来收集,大部分胆汁酸在回盲部进行重吸收;二是排出的粪便。粪便收集时动物要进行禁食不禁水处理。可以收集6-8小时内粪便,可以根据收集的粪便量来调整。体外胆汁酸是稳定的,不稳定的是体内胆汁酸,不同个体肝肠循环次数不一样,使得个体差异大。
Q5. 小鼠如何区分肠段以获取不同肠段内容物?
A5:1)根据研究目的收集不同肠段内容物(十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠)。
2)小鼠肠段分区:胃幽门开始,0.5cm处为十二指肠,盲肠前1cm取为回肠,盲肠后端1cm处为结肠,十二指肠和回肠中间肠道为空肠,直肠很短,取肛门前一段即可。
Q6. 请问目前发现的胆汁酸总共有多少,可定量的胆汁酸是否都是机体里含量相对较高的,是不是还有新的胆汁酸在持续发现中?
A6:目前麦特绘谱胆汁酸谱检测包含61种。该胆汁酸的检测方法可以实现一些较低浓度的检出,像鼠胆酸,之前在人体中未测出,我们的方法灵敏度较高,就可以检测到。另外,有些胆汁酸成分缺乏标准品,需要人工合成,所以还有很多胆汁酸成分有待发现。
Q7. 请问血清/血浆、肝脏、粪便胆汁酸是否能反应胆汁酸肠肝循环中的胆汁酸合成、排泄、重吸收?
A7:不同样本胆汁酸表现的意义不同,建议结合起来进行研究。血液样本代表的是胆汁酸循环系统水平,肝脏样本代表胆汁酸的合成水平,粪便代表的是胆汁酸排泄水平,以及与菌群的关系。当然还需要结合相应的代谢酶、转运体等等进行相互验证。
Q8. 如何知道哪些菌群与胆汁酸之间有联系?
A8:可以进行关联分析,根据差异菌群和差异胆汁酸进行相关性分析观察某个菌群和某个胆汁酸之间相关性强弱。另外也要结合文献报道梳理哪些菌群参与胆汁酸代谢或者哪些胆汁酸对菌群有影响。
Q9. 肝脏胆汁酸可以说明肝细胞损伤吗?
A9:可以的,目前很多老师针对不同类型肝细胞损伤进行胆汁酸检测,希望可以通过胆汁酸与其他指标结合进行不同类型肝损伤分型。
Q10. 如果想通过肠肝循环分析某一种多糖对肥胖疾病的作用机制,但目前并不明确是否能引起胆汁酸变化,是否可以通过菌群的变化来判断与哪一种胆汁酸有关,从而找出通路?
A10:在多糖药效明确的前提下,通过菌群变化难以判断胆汁酸的变化,但是具体哪种胆汁酸发生变化要进行胆汁酸谱检测才能确定。
Q11. 胆汁酸在粪便、血液、肠道、肝脏中的含量分布是否有区别?
A11:胆汁酸在样本中的分布是有区别的。肝脏以初级胆酸、结合型胆汁酸为主,回肠以结合型胆酸为主,而到了盲肠和结肠又以游离型的次级胆酸为主。从我们的以往数据来看,粪便和肠道内容物中的胆汁酸最为丰富。
Q12. 做胆汁酸相关研究,用小鼠模型还是大鼠模型好?大鼠没有胆囊这个会有影响吗?
A12:小鼠模型和大鼠模型都有研究,根据研究实际需求、样本量是否满足等情况来选择;目前未看到相关有无胆囊对胆汁酸影响的对比文献,可以从有胆囊和胆囊切除或者胆囊切除前后进行胆汁酸变化研究。
Q13. 请问胆汁酸淤积一般指的是在肝脏中淤积还是肠道中淤积?血清胆汁酸谱不同类型比例可以反映肝脏中胆汁酸的淤积吗?
A13:胆汁淤积一般指肝脏淤积,血清胆汁酸变化可以反映肝脏胆汁酸淤积,具体要看不同胆汁酸的变化情况。
Q14. 哪些肿瘤细胞里能够检测出胆汁酸?
A14:很多肿瘤细胞都可以,只是量和种类有差别,整体浓度偏低。肝胆、消化道肿瘤偏多,但现在也有其他肿瘤开展胆汁酸探索性研究。
Q15. 如果测小鼠粪便中的的胆汁酸谱随小鼠生长的变化,同一批小鼠每间隔一个月取样,每次取样时需要禁食取样吗?禁食多长?
A15:需要禁食的,禁食8-12个小时,保证每次都禁食时间相同。注意收集时间,如果是上午收集,建议都是上午收集,尽量把收集的时间窗控制好。
Q16. 检测胆汁酸怎么采样?血清和粪便胆汁酸,哪个对于解释疾病机制更好一些?
A16:饮食对胆汁酸的影响很大,采样前要禁食。如果是间隔一段时间重复取样,保证每次收集时间都一样,如果是上午收集,建议都是上午收集,并把收集的时间窗控制好。研究目标不同,选择也不同。需要根据研究目的来选择,如果是菌群和胆汁酸首选粪便,如果是偏向标志物,建议血清样本。两者结合更系统。
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