高分辨质谱时代：Orbitrap在中药研究中的应用与突破

卵巢早衰（premature ovarian insufficiency，POI）是指40岁前卵巢功能衰退，导致月经异常、不孕等问题，如果不及时发现和干预，不仅影响生育，还可能导致提早绝经、骨质疏松、心血管疾病等健康风险。现有激素替代治疗虽可缓解症状，但难以恢复卵巢储备和生育能力，且长期使用存在血栓风险，因此亟需更安全有效的治疗策略。

中医认为本病与“肾主生殖、血瘀致衰”相关，补肾活血法应用广泛。补肾活血方（BHR）由熟地黄、黄芪、当归等十味药组成，配方中熟地黄、山茱萸滋补肾精，黄芪、当归益气活血，菟丝子温阳益精，川芎、牡丹皮活血祛瘀，茯苓、山药健脾渗湿，白芍养血柔肝，多味协同，共奏补肾填精、活血祛瘀之效，与现代“改善卵巢血流、抑制氧化应激、调节免疫”之理念高度契合。BHR临床用于月经异常及卵巢储备下降，已证实可提高获卵数和活产率，但其作用机制尚不明确。

研究者采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Orbitrap Exploris 120）技术对BHR水提醇沉制剂进行成分鉴定，共检出944种化学成分，主要包括萜类、黄酮类、酚类、生物碱、芳香族化合物、苯丙素类、脂肪酰类、木脂素类、环烯醚萜类和醌类等。其中，槲皮素、熊果酸、表儿茶素、没食子酸、染料木素等被证实具有抗氧化、抗凋亡、调节雌激素受体及改善卵巢微环境等多重生物活性，推测为BHR发挥药效的潜在关键物质基础。

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糖尿病骨质疏松（DOP）是糖尿病常见的慢性并发症之一，临床主要表现为骨量减少、骨结构受损及骨折风险升高。持续高血糖可通过氧化应激、晚期糖基化终产物积累及慢性炎症反应，抑制成骨细胞功能并增强破骨细胞活性，导致骨形成减少、骨吸收增加。目前西医多采用降糖与抗骨质疏松联合治疗，但仍存在不良反应较多、费用较高及依从性不足等问题。

中医认为本病与“肾主骨生髓、肝主筋藏血”相关，属“消渴并发骨痿”，治疗以滋阴补肾、填精益髓为主。熟地黄配伍山茱萸为常用经典药对，在相关疾病防治中应用广泛，但其具体作用机制仍有待阐明。

利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Exactive-MS）共鉴定出56个化合物。网络药理学进一步筛选出口服生物利用度（OB）＞30%、类药性（DL）＞0.18的17个活性成分，并结合文献报道补充6个具有明确抗糖尿病或抗骨质疏松作用的化合物，最终锁定山茱萸苷、羟基芫花素、毛蕊花苷、梓醇、松果菊苷等为潜在关键活性成分，为后续机制研究奠定基础。

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中成药因其“天然、安全”的特点，被广泛用于运动人群的日常保健和疾病辅助治疗。然而，多项研究表明，部分中药原料中天然存在世界反兴奋剂机构禁用物质，如麻黄中的麻黄碱、马钱子中的士的宁以及罂粟壳中的吗啡等，这使得运动员在不知情的情况下摄入中成药时存在较高的“误服兴奋剂”风险。在此背景下，建立一种高通量、广覆盖的筛查方法，对中成药中的潜在违禁成分进行快速检测，具有重要意义。

本研究基于超高效液相色谱-四极杆Orbitrap高分辨质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS），构建了一种针对中成药中兴奋剂成分的综合筛查方法。通过优化乙腈提取、色谱分离及正负离子同时切换检测条件，实现了对303种禁用物质（涵盖合成代谢类、β₂受体激动剂、兴奋剂、麻醉剂等12类物质）的同时检测。该方法在23分钟内即可完成一次分析，具有高分辨率、高灵敏度以及数据可追溯的特点，适用于不同剂型（液体、固体、半固体及油性制剂）的中成药样品检测。

在方法学验证方面，结果显示该方法整体性能良好：超过95%的目标物检测限低于50 ng/g（或ng/mL），能够满足痕量检测需求；不同剂型样品的回收率总体处于可接受范围，且日间精密度良好。尽管存在一定基质效应（尤其在油性样品中表现更明显），但通过高分辨质谱和二级碎片信息的结合，仍可实现较高的定性准确性。

在实际应用中，研究团队对100份市售中成药样品进行了检测，结果令人警醒：去甲乌药碱检出率高达54%，麻黄碱为42%，此外还检测到士的宁（11%）和吗啡（2%）。这表明中成药中含有潜在兴奋剂成分的现象较为普遍，尤其是去甲乌药碱和麻黄碱等物质，对运动员构成较高的兴奋剂违规风险。

在样品中疑似检测到卡非多（carphedon），保留时间为4.38分钟（a1），与添加了参考物质的阳性质控样本（QCP）相比（b1），保留时间相差0.06分钟。该差异符合验收标准（ΔRT ≤ 0.1分钟），表明该样品可疑。然而，在相同的采集时间下，样品和QCP的二级质谱碎片离子存在明显差异，因此排除疑似检出。