2026-03-12 14:30:13, Gator Bio Gator Bio 小鳄生物
丙午马年奔腾至,科研征途再启程。
对于奋斗在实验室一线的科学家们而言,
真正的 “福气”,莫过于拥有一件趁手的 “神兵利器”。
本期,我们将为您深度解读开年之际发表于 Nature Communications 与 iMeta 的两篇重磅研究,看 Gator® 如何助力科学家们在全新领域取得关键突破!
突破性进展一
Gator® BLI 直接检测红细胞与抗体亲和力,奠定床旁快检基石[1]
其亮点在于:
(1) 摆脱冷链:通过去除血红蛋白但保留 ABO 表面抗原的红细胞膜,结合荧光纳米颗粒标记和冻干技术,试剂可在室温稳定储存至少 2 年。
(2) 快速精准:采用双层纸垫捕获血凝反应,结合荧光定量,将检测时间缩短至约 8 分钟,无需系列稀释。
(3) 临床级检测性能:在 641 名受试者的注册临床试验中,ABO 血型鉴定与金标准(凝胶微柱法)100% 一致,抗体滴度检测符合率达 80.75%(κ值=0.8623)。
该研究开发的手持式纸基检测方法,可同时完成 ABO 血型鉴定和定量抗体滴度检测,为规模化生产、跨机构标准化应用提供了可能,尤其适用于急诊及资源有限场景,为临床输血决策提供了可靠支持。
图1. 基于 RBCbm @Fluo 的 POCT 系统的示意设计及应用
文中使用 Gator® BLI 直接检测了红细胞与抗体 IgM 的结合能力,验证了通过生物工程改造的红细胞 RBCbm@Fluo 与普通红细胞结合抗体 IgM 的亲和力未有明显变化,与其他抗原性、特异性、抗原强度实验结果共同验证了 RBCbm@Fluo 保留了血型分析和抗体滴度测定所需的必要特性。Gator® BLI 具体检测流程:
(1) 使用 SA 生物传感器固化 Bio-WGA(20 μg/mL);
(2) 然后结合 RBC、RBCbm 和 RBCbm@Fluo 红细胞(稀释至 1×108 cells/mL);
(3) 再结合 IgM(1000 μg/mL 最高,2 倍梯度系列稀释,7 个浓度)。
图2. Gator® BLI 检测红细胞与 IgM 直接结合动力学及亲和力
突破性进展二
Gator® 助力天然产物共价抑制剂筛选,发表于 iMeta(IF=33.2)[2]
整个筛选流程层层递进,其中 Gator® BLI 在最后一步结合验证中提供了关键数据。
(一)、Ccc-Chip 平台验证:该原理基于竞争性结合(图4A),将靶蛋白固定在芯片上,如果待测分子能与靶蛋白半胱氨酸共价结合,就会与带标记的探针(IAA-yne)竞争,导致荧光信号减弱。研究团队首先在 P50、AKT1、KRASG12C 等蛋白芯片上验证了方法的可行性,并针对 mIDH1 蛋白芯片系统优化了探针浓度、点击化学反应液和蛋白浓度,为后续高通量筛选奠定基础。
图4. Ccc-Chip 平台原理和检测结果
(二)、提取物初筛:110 种药用植物提取物依次经 DSF(差示扫描荧光)和 Ccc-Chip 筛选(图 5A)。DSF 筛选以 ΔTm > 1.5℃ 为标准,筛选出使 mIDH1 热稳定性变化的提取物。Ccc-Chip 确认 T30、T36、T56、T96、T110 五个提取物与 IAA-yne 竞争结合 mIDH1。随后的功能验证发现,仅 T96(卡瓦胡椒提取物)在 TS603 和 HT1080 细胞中剂量依赖性抑制 2-HG 生成,确定为候选提取物(图 5H 和 5I)。
图5. 靶向 mIDH1 的提取物筛选流程
(三)、活性分子追踪:T96 候选提取物经制备型 HPLC 分离为 35 个馏分,DSF + Ccc-Chip 复筛发现馏分 7–11 和 18–22 具有与 IAA-yne 竞争结合 mIDH1 的能力。细胞验证显示,馏分 19 和 20 显著抑制 2-HG 生成。合并馏分 19 和 20,经 LC-MS/MS 分析和虚拟共价对接筛选,最终鉴定出卡瓦胡椒素 C(Flc)为候选共价活性分子。
(四)、利用 Gator® BLI 开展结合验证:测定 Flc(分子量为 300.31 Da)与 IDH1-R132H 的结合常数(KD = 0.516 μM),呈现快结合/慢解离的特征;C269A 位点突变后亲和力明显下降(KD= 133 μM),证实了 Cys269 是 Flc 的主要结合位点。Gator® BLI 检测流程:使用 SMAP 生物传感器固化 biotin-IDH1-R132H 或 R132H-C269A 蛋白,结合不同浓度的 Flc。
图6. Gator® BLI 检测 Flc 与 IDH1 亲和力结果
马力全开
部分图片由 AI 技术生成
参考文献
[1] Xiaohui Wang. et al. Paper-based fluorescent assay for blood typing and antibody titer determination using long-term ambient-stored bioengineered RBCs. Nature Communications. 2026.
[2] Zhao Cui. et al. Construction of a clickable probe‐based protein chip platform for discovering covalent mIDH1 inhibitors from natural medicinal extracts. iMeta. 2026.
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