为什么检测抗体纯度时非还原 CE-SDS 与 SEC-HPLC 都要做？

2025-11-12 10:12:10 安捷伦细胞分析事业部（BioTek）

纯度测定是抗体药物的一项重要检测指标，该指标直接反映了抗体纯化工艺水平及产品质量的高低。抗体纯度的测定可以理解为大小异质性的分析，大小异质性一般可以分为三类，即完整的单体、片段和多聚体。片段包括降解的单抗和组装不完整的轻重链等；而多聚体则包括二聚体、寡聚体和更复杂的聚体。片段和多聚体作为杂质，不仅可能是抗体药物中的无效成分，而且还可能是导致抗体免疫原性的重要原因之一。因此，监管机构要求对治疗性抗体纯度进行全面表征。

为了避免一种检测方法在抗体纯度检测中的偏差，一般选用至少两种分离方法进行检测，以得到相对准确的纯度信息。由于 SEC 和 CE-SDS 相对简单易行且分析结果互补，成为分析抗体类药物大小异质性的两种常规方法。

体积排阻色谱（SEC）是利用多孔凝胶固定相的独特特性而产生的一种主要依据分子尺寸大小的差异来分离的液相色谱方法。大分子不能进入凝胶孔洞而被排阻，首先被洗脱出来，小分子可进入大部分凝胶孔洞，在柱中滞留，会更慢地被洗脱出来。SEC 分离发生在天然环境中，可以分辨不同的聚集体，如二聚体和三聚体。而由非共价结合的片段组成的杂质往往以一个碎片单峰的形式出现，因此不能对片段进行分析。因而 SEC 侧重于对抗体的非共价多聚体进行客观的分析。

图 1. SEC 技术分析 NIST 单抗结果（使用安捷伦 1290 Infinity II Bio LC 系统），可以清晰看到多聚体情况

毛细管电泳 CE-SDS 是以高压直流电场为驱动力，以毛细管为分离泳道，毛细管内先填充凝胶，此时凝胶会在毛细管内形成分子筛，样品依分子量大小在毛细管内移动的速度不同而进行分离。相比之下，CE-SDS 是在变性条件下进行的，这种条件会破坏非共价聚合物。这使得在非还原条件下分析时能够实现低分子量片段的高分辨率分离，但无法用于高分子量聚合物的表征。非还原 CE-SDS 可用于测定单体的纯度百分比以及每个单独低分子量片段的定量。

图 2 . 非还原 CE-SDS 技术分析 NIST 单抗结果（使用安捷伦 ProteoAnalyzer 系统），可以清晰看到轻重链片段分布情况

总结起来就是，在大小异质性的聚体分析上 SEC 分析比 CE-SDS 分析更加客观；在大小异质性的片段分析上 CE-SDS 分析比 SEC 更准确。

安捷伦公司的研究人员利用非还原 CE-SDS 及 SEC 技术评价了 NIST 抗体的大小异质性，初步阐明了二者结果差异和互补的表现，为抗体制品的质量控制研究提供了理论基础。如需了解技术方法细节，请扫码下载应用技术文档《抗体杂质分析的互补方法学》。

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