2024-04-15 16:40:40, 中检维康 北京中检维康生物技术有限公司
国家卫生健康委员会3月12日发布了《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》(GB 2760-2024)等47项食品安全国家标准和6项修改单的公告(2024年 第1号),其中包含了GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定。新的标准于2024年2月8日发布,将于2024年8月8日开始实施。
什么是乳铁蛋白?
乳铁蛋白是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白,乳铁蛋白存在于人体的乳汁和各种分泌液中,在母乳中含量最高,初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能与病原微生物竞争铁源,抵御病原微生物侵袭,从而保护婴幼儿免疫损伤。
肝素亲和柱简介
参考《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》,肝素亲和柱能够特异性的纯化样品中的乳铁蛋白,样品前处理后,通过亲和柱净化,乳铁蛋白特异性吸附在亲和柱上,用淋洗液将亲和柱上的杂质除去,用洗脱液通过分离柱,将乳铁蛋白从亲和柱上分离下来,最后,将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。
肝素亲和柱规格:
柱容量:2mg,
包装:10支,25支/盒,
保存:2-8℃
保质期:18个月
使用对象
本方法适用于巴氏杀菌乳,调制乳,含乳饮料,调制乳粉,乳基婴幼儿配方食品等。
实验溶液制备
洗脱液(磷酸盐缓冲液Ⅰ):将肝素洗脱液固体试剂包(货号:C3012)用250mL纯水溶解,混匀,配制于洁净密封的试剂瓶中,保质期6个月。
磷酸盐缓冲液Ⅱ:将肝素磷酸盐缓冲液Ⅱ固体试剂包(货号:C3010)用1000mL纯水溶解,混匀,配制于洁净密封的试剂瓶中,保质期1个月。
样品前处理:
1、液体奶样品:(巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料)
称取 5g (精确至0.01g )试样于烧杯中,加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ 提取,分次将样品转移至 25mL容量瓶,用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度,充分混匀后转入离心管,在 4 ℃ 条件下 10000r / min 离心8min ,取样液待净化。
2、固体样品:(婴幼儿配方奶粉、乳粉等)
称取 1g~5g (精确至 0.01g )试样于烧杯中,加入温热(温度不超过 50℃ )的磷酸盐缓冲液Ⅱ,搅拌使样品溶解,冷却至室温,分次将样品转移至 50mL 容量瓶并用磷酸盐缓冲液Ⅱ 定容至刻度,充分混匀后转入离心管中,取 40.0mL 溶液在 4℃条件下 10000r / min 离心 8min,取样液待净化。
亲和柱净化程序:
肝素亲和柱(货号:IAC323)使用前先加入5.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ 活化。准确移取 10. 0mL 上述样液过柱,控制流速在1mL / min~3mL / min,待样液滴完后,用 10.0mL 磷酸盐缓冲液Ⅱ 淋洗,弃去流出液,再用5.0mL磷酸盐缓冲液Ⅰ 洗脱,收集洗脱液并用磷酸盐缓冲液Ⅰ定容至5.0mL,过0.45μm水相针头滤器,供上机检测分析用。
液相色谱条件:
色谱柱:Cloversil XB-C4, 5μm, 300Å, 4.6×250mm
流速:1.0 mL/min
检测器:紫外检测器,280nm
进样体积:50uL
流动相:0.1%三氟乙酸与乙腈梯度洗脱,见下表
柱温:30℃
表1 梯度洗脱表
时间 /min
乙腈 / %
0.1%三氟乙酸 / %
01585208515221585251585
实验图谱及数据:
高效液相色谱仪检测乳铁蛋白标准品(400ppm)谱图如下:
添加回收实验数据如下:
07-01 英斯特朗
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