与多发性骨髓瘤“死磕到底”-安捷伦细胞分析助力新靶点FCRL5 CAR T研究

2024-02-04 13:10:54, 安捷伦细胞分析安捷伦细胞分析事业部（BioTek）

多发性骨髓瘤

multiple myeloma, MM

多发性骨髓瘤 (multiple myeloma, MM) 呈进展性且无法治愈，患者终将面临复发难题，且随着复发次数增多，治疗难度加大。但是CAR T疗法的出现打破了治疗的困局，作为活细胞药物只需一次回输便能起到持久的缓解作用。目前已有两款靶向B细胞成熟抗原BCMA的CAR T产品上市：Abecma (idecabtagene vicleucel)，Carvykti (西达基奥仑赛)。但是CAR T疗法也很难逃脱复发的魔咒，已有研究统计数据表明30-70 % 的病人在接受CD19 CAR T 治疗后仍然复发^[1]，主要由于肿瘤抗原表达的下调和丢失。因此，寻求更多有效的CAR T治疗靶点是MM细胞疗法未来的发展重点。除了BCMA和GPRC5D，目前靶向MM的热门靶点还有CD38、CD47、CD138、SLAMF7和FcRH5等，这些靶点均在恶性浆细胞表面高表达（图1）。

图1. MM的研究的热门靶点^[2]

本文将为大家介绍另一个MM新靶点Fc receptor-like 5 (FCRL5)。FCRL5是骨髓瘤浆细胞上的一种特异性表面标志物，在患者的恶性浆细胞中持续表达，但在正常组织中几乎不表达（图2）。其中靶向FCRL5的ADC药物展现了有效的MM治疗效果，因此FCRL5可以成为治疗MM的有效CAR T靶点。

图2. FCRL5除了在骨髓和淋巴组织中表达，在其他组织中低表达或者不表达（The Human Protein Atlas）

新年伊始，中国科学家在STTT上发表了FCRL5 CAR T细胞治疗MM的最新研究，特别是针对染色体1q21扩增型（1q21 gain）MM，其在中国MM患者中的阳性率较高，可达40%-60%。研究团队通过分析正常人、MM患者1q21-和1q21+浆细胞（CD45+CD38+）中FCRL5表达发现，MM患者特别是1q21 gain异常型中FCRL5表达较高（数据未展示，请参考原文）。

另外考虑到CAR T疗法的持久性，研究者将IL-15加入到CAR的设计中形成IL-15自分泌CAR（图3），也就是在共刺激域后面加上IL-15序列共表达。

图3. 表达 IL-15 的 FCRL5 特异性 CAR设计图

本研究通过慢病毒转导T细胞制备CAR T，转导3天后检测CAR的表达（GFP），转导7天后检测记忆T细胞比例（CD62L、CD45RO），转导10天后通过CFSE染料检测CAR T细胞的增殖（图4）。流式的检测结果表明FCRL5 CAR/IL-15 T较FCRL5 CAR T的中央记忆细胞比例更高且增殖能力更强，提示FCRL5 CAR/IL-15细胞有更强的持久效力（图4）。

图4. NovoCyte 流式细胞仪检测CAR T细胞表型和功能

通过xCELLigence RTCA实时杀伤检测也证实了FCRL5 CAR/IL-15 T细胞的体外杀伤能力较FCRL5 CAR T细胞更强（图5）。另外在FCRL5+MM1.S肿瘤细胞的NSG移植小鼠模型中，IL-15的表达增强FCRL5 CAR T细胞的体内效力以及持久性，不仅做到肿瘤的完全清除，直至试验结束仍有40%小鼠存活（60天）（图6）。

图5. xCELLigence RTCA实时检测CAR T细胞对靶细胞的杀伤

图6. IL-15增强FCRL5 CAR T细胞的体内效力和持久性

在这项研究中，研究者也证明了即使BCMA CAR T细胞治疗后，BCMA表达减少，FCRL5也能持续表达。FCRL5/IL-15 CAR T细胞促进T细胞向中央记忆的转变，同时减少了PD-1表达，促进T细胞更持久以及更有效的抗肿瘤反应，从而克服目前BCMA CAR T细胞疗法的局限性。

作为细胞治疗专业研究工具，安捷伦细胞分析事业部的xCELLigence RTCA实时细胞分析仪和NovoCyte智能型流式细胞仪在该研究中展现了独特的优势：

xCELLigence RTCA 实时细胞分析仪

基于阻抗技术的实时灵敏的细胞杀伤检测
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参考文献

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1. Five-year outcomes for refractory B-Cell Lymphomas with CAR T-cell therapy. N. Engl. J. Med. 384, 673–674 (2021).

2. Targeted Therapies for Multiple Myeloma. Journal of personalized medicine, 11(5), 334. (2021)

3. Fc receptor-like 5 (FCRL5)-directed CAR-T cells exhibit antitumor activity against multiple myeloma. Sig Transduct Target Ther 9, 16 (2024).

关于安捷伦细胞分析

安捷伦细胞分析平台包括xCELLigence RTCA实时细胞分析仪、Novocyte系列流式细胞仪、Seahorse能量代谢分析仪以及Synergy系列微孔板检测仪和Cytation 系列（共聚焦）细胞成像多功能微孔板检测仪。安捷伦细胞分析平台聚焦基础科研与细胞与基因治疗产品的开发全流程，作为适配新一代疗法的强大分析工具，提供多方位的细胞效力检测和深度的细胞分析，并致力于研发、生产质控以及临床的全方位检测与分析方案开发。