技术应用 | 在不同生物复杂性水平上定量评估细胞信号转导

ELISA 是许多研究实验室不可或缺的工具，若仔细操作，可以提供对生物过程有力的见解。这种检测方法已经非常成熟，使用商品化试剂盒结合洗板机可以有效地简化实验流程。

当蛋白质离开其自然环境，例如细胞裂解时，它们通常会变得不稳定。因此，在细胞裂解缓冲液中添加蛋白抑制剂，并迅速将裂解物转移到 4°C 保存是至关重要的。

如何分析和解释靶分子的核易位有许多不同的方法。最直接的方法是检测细胞核信号变化。这一过程可以在安捷伦BioTek Gen5 软件中通过双选域（双 Mask）分析轻松完成。

超低吸附圆底微孔板是很好的形成 3D 细胞球体的理想选择，然而由于高衍射曲面的存在，圆底孔板的实际成像效果并不理想。建议将球体转移到平底孔板中，推荐使用安捷伦 96 孔平底微孔板 (货号：204626-100)。在高通量成像过程中，微孔板移动可能会干扰球体的位置和方向。因此我们建议您将球体包埋在某种基质中 (使用 2mg/mL 胶原蛋白或琼脂糖) 可以确保球体保持其稳定的位置和方向。

高强度的光照往往会产生光漂白，当对较厚样品进行共聚焦光学层切成像时，细胞会反复暴露在高强度激光下，加剧光漂白。抗猝灭试剂可以消除活性氧，有助于保持荧光基团的稳定性，对于含水样品来说，无论介质是 PBS、甘油等还是其他物质，使用抗猝灭试剂都能确保获得高质量 3D 细胞图像。

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本研究对 TGF-β 和 BMP 信号途径中受体介导的 SMAD 蛋白 (R-SMADs) 的配体诱导磷酸化进行了定量评价。此外，在三个不同的生物复杂性水平上评估了 R-SMADs 的下游生物学效应。

本研究描述了在 TGF-β 诱导 EMT 的细胞模型中，定量评估 TGF-β/SMAD 通路激活的生化和细胞反应的高通量方法。通路激活的影响在不同的生物复杂性水平——生化，细胞和多细胞/微组织——使用二维和三维(球体)细胞模型进行检测。

高通量信号传导检测平台推荐

Cytation C10 共聚焦微孔板成像检测系统采用独特设计，将自动共聚焦成像和宽场显微成像与传统的多功能微孔板检测相结合。自动化水镜和转盘式共聚焦模块增加了分辨率和光学层切能力，适用于 3D 细胞成像。除了共聚焦系统，C10 还具备宽场荧光、明场和相差成像系统。机载环境控制功能支持活细胞分析，完美实现了在生化水平、细胞水平和多细胞/微组织等不同生物复杂性水平上进行生物学效应评价。

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您可以通过回看网络研讨会，了解使用来自Cell signaling Technology的经过严格验证的免疫分析试剂和Agilent BioTek Cytation C10共聚焦细胞成像检测系统开发的——在 2D 和3D 细胞模型中定量评估TGF-β信号传导的高通量方法。