【假期清洁小贴士】色谱柱篇

2024-01-30 21:23:44, 沃特世 沃特世科技(上海)有限公司



















在液相分析中,色谱柱性能对实验结果好坏有直接影响。长假来临之际,妥帖安置好自己的日常工作“小伙伴”,才能保障年后顺利复工!借此机会小编来给大家介绍一些色谱柱的清洗维护方法。


反相色谱柱清洗流程


适用于T3/C18+/Shield RP18/C18SB等C18、C8、苯基、氟苯基等键合相。


1.

90%水相(若分析方法初始水相比例高于90%,可使用相同的水相比例)等度洗脱10-20个柱体积,保证缓冲盐及极性大的成分(如糖、醇等组分) 冲洗干净; 

2.

梯度方式过渡至50%有机相并等度洗脱10-20个柱体积,以冲洗中等极性组分;

3.

梯度方式过渡至100%有机相,并最后用100%有机相等度洗脱10-20个柱体积,保证非极性、强保留成分冲洗干净;

4.

柱温在色谱柱耐受范围内将提高2-5度,方法运行完及时关闭柱温;

5.

反相色谱柱长时间保存时建议使用100%乙腈或甲醇。


表1. 不同内径及长度色谱柱柱体积参考表。


以4.6 × 150 mm规格色谱柱为例,柱体积为2.5 mL时,可参考如下冲洗梯度:若样品分析方法中初始水相比例更高,建议与分析方法保持一致,如有需要可反复冲洗2-3次。


图1. 冲洗梯度。


HILIC模式色谱柱清洗流程


适用于HILIC/BEH Amide/BEH Z-HILIC等色谱柱。


对于HILIC模式色谱柱,参照如下方法进行清洗,如有必要可反复冲洗2-3次。


  • 若流动相体系中不含缓冲盐


1.

95:5的乙腈:水等度洗脱10-20个柱体积,将极性小的组分冲洗干净;

2.

梯度洗脱至50:50的乙腈:水,并等度维持10-20个柱体积,冲洗中等极性的组分;

3.

将流速降低至原流速一半(如由1 mL/min降至0.5 mL/min),以避免水相升高时突然发生压力骤升而导致超压;

4.

梯度洗脱至5:95的乙腈:水,并等度维持10-20个柱体积;对BEH  Amide或BEH Z-HILIC可洗脱至100%水相;

5.

等度5-10个柱体积置换溶剂,并将色谱柱保存在100%乙腈中;

6.

柱温在色谱柱耐受范围内将提高2-5度,方法运行完及时关闭柱温。


  • 若流动相体系中含有缓冲盐时: 

1.

先用50:50的乙腈:水等度冲洗,去除缓冲盐;

2.

再按照不含缓冲盐步骤1开始进行清洗。


在色谱柱清洗完成后,可参考【假期关机小贴士】仪器篇再对您的仪器进行维护。


除了清洗维护,在日常工作中您可能想了解:


  • 拿到一支新色谱柱,怎么活化?

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  • 小颗粒色谱柱压力升高,怎么排查?


此类疑问您可在沃特世技术服务公众号-耗材应用-消耗品资料库-色谱柱的使用维护/资料工具与常见问题中查询。


色谱柱的使用维护/资料工具与常见问题(左右滑动查看)


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