沃特世脂质偶联ASO LC-MS 标准品，助力寡核苷酸分析

2024-03-06 12:12:10, 沃特世技术服务沃特世科技（上海）有限公司

沃特世Oligoworks SPE试剂盒自问世以来，因其精心设计的实验流程操作，有利于提高实验室分析生物样本（如血浆、尿液、组织等样本）中寡核苷酸类药物与代谢物的提取、净化、定量分析的工作效率，并能带来更出色的LC-MS灵敏度和重现性。

图1. 沃特世OligoWorks SPE（固相萃取）试剂盒及其组件。

目前，寡核苷酸药研究的较多主要有反义寡核苷酸（ASO）、小干扰RNA（siRNA），其挑战之一就是递送问题。为帮助实验室小伙伴定量不同分子量大小、不同结构的ASO，沃特世全新推出OligoWorks标准品 — 脂质偶联ASO LC-MS（SKU:

186010751）。脂质偶联ASO LC-MS标准品为gapmer化学修饰的16残基反义寡核苷酸(ASO)，包含完全硫代磷酸化的骨架、5''端棕榈酸酯修饰和甲氧基乙基修饰末端，其序列与分子信息如下图所示。

图2. 序列和分子信息。

脂质偶联ASO LC-MS标准品可作为性能检查和潜在的系统适应性标准品，配合OligoWorks SPE试剂盒的操作使用，可用于寡核苷酸提取操作、LC-UV和LC-MS分析以及IP-RPLC、HILIC或IEX分离。以下是该标准品用于LC-UV和LC-MS分析的分析方法示例。

离子对反相液相色谱法(IP-RP-LC)联用光学(UV)和质谱分析法(MS)

流动相A：

含0.1% DIPEA和1% HFIP的18.2 MΩ水溶液

流动相B：

含0.0375% DIPEA和0.075% HFIP的65:35乙腈:18.2 MΩ水溶液

色谱柱：

ACQUITY Premier BEH C₁₈寡核苷酸分析专用柱, 300 Å, 1.7 µm, 2.1 × 150 mm

液相色谱参数：

系统：

ACQUITY Premier BSM系统（BioAccord™系统的一部分）

检测器：

ACQUITY UPLC™ TUV检测器

波长：

260 nm

流速：

0.4 mL/min

进样体积：

10 µL

梯度：

进样期间，初始流动相B为35%，保持2 min；9 min内升至50%；11 min内升至90%，保持1 min；然后用35% B平衡色谱柱8 min。

柱温：

70 ˚C

样品温度：

5 ˚C

MS参数：

检测器：

ACQUITY RDa™检测器

模式：

包括碎片的全扫描

质量范围：

高(400~5000 m/z)

极性：

负离子

扫描速率：

2 Hz

锥孔电压：

40 V

碎裂锥孔电压：

80~200 V

毛细管电压：

0.80 kV

图3. 脂质偶联ASO LC-MS标准品的IP-RP-LC-UV-MS分析。(A)为UV谱图，(B)为低能量总离子流色谱图。硫代磷酸酯寡聚物的非对映体性质导致UV谱图中8.33 min和8.43 min处的色谱峰部分分离。总离子流色谱图(TIC) 8.35 min和8.45 min处的谱峰仍然具有这一特征。(C)为脂质偶联ASO LC-MS标准品的质谱图，其中两个峰的质量数信息相同。去卷积质谱图所示为中性分子质量数为6046~6047 Da的完整寡聚物和少量质量数为6031 Da的氧化物质。