沃特世脂质偶联ASO LC-MS 标准品,助力寡核苷酸分析

2024-03-06 12:12:10, 沃特世技术服务 沃特世科技(上海)有限公司


沃特世Oligoworks SPE试剂盒自问世以来,因其精心设计的实验流程操作,有利于提高实验室分析生物样本(如血浆、尿液、组织等样本)中寡核苷酸类药物与代谢物的提取、净化、定量分析的工作效率,并能带来更出色的LC-MS灵敏度和重现性。

图1. 沃特世OligoWorks SPE(固相萃取)试剂盒及其组件。

目前,寡核苷酸药研究的较多主要有反义寡核苷酸(ASO)、小干扰RNA(siRNA),其挑战之一就是递送问题。为帮助实验室小伙伴定量不同分子量大小、不同结构的ASO,沃特世全新推出OligoWorks标准品 — 脂质偶联ASO LC-MS(SKU:186010751)。脂质偶联ASO LC-MS标准品为gapmer化学修饰的16残基反义寡核苷酸(ASO),包含完全硫代磷酸化的骨架、5''端棕榈酸酯修饰和甲氧基乙基修饰末端,其序列与分子信息如下图所示。

图2. 序列和分子信息。

脂质偶联ASO LC-MS标准品可作为性能检查和潜在的系统适应性标准品,配合OligoWorks SPE试剂盒的操作使用,可用于寡核苷酸提取操作、LC-UV和LC-MS分析以及IP-RPLC、HILIC或IEX分离。以下是该标准品用于LC-UV和LC-MS分析的分析方法示例。

离子对反相液相色谱法(IP-RP-LC)联用光学(UV)和质谱分析法(MS)

流动相A:

含0.1% DIPEA和1% HFIP的18.2 MΩ水溶液

流动相B:

含0.0375% DIPEA和0.075% HFIP的65:35乙腈:18.2 MΩ水溶液

色谱柱:

ACQUITY Premier BEH C18寡核苷酸分析专用柱, 300 Å, 1.7 µm, 2.1 × 150 mm

液相色谱参数:

系统:

ACQUITY Premier BSM系统(BioAccord™系统的一部分)

检测器:

ACQUITY UPLC™ TUV检测器

波长:

260 nm

流速:

0.4 mL/min

进样体积:

10 µL

梯度:

进样期间,初始流动相B为35%,保持2 min;9 min内升至50%;11 min内升至90%,保持1 min;然后用35% B平衡色谱柱8 min。

柱温:

70 ˚C

样品温度:

5 ˚C

MS参数:

检测器:

ACQUITY RDa™检测器

模式:

包括碎片的全扫描

质量范围:

高(400~5000 m/z)

极性:

负离子

扫描速率:

2 Hz

锥孔电压:

40 V

碎裂锥孔电压:

80~200 V

毛细管电压:

0.80 kV

图3. 脂质偶联ASO LC-MS标准品的IP-RP-LC-UV-MS分析。(A)为UV谱图,(B)为低能量总离子流色谱图。硫代磷酸酯寡聚物的非对映体性质导致UV谱图中8.33 min和8.43 min处的色谱峰部分分离。总离子流色谱图(TIC) 8.35 min和8.45 min处的谱峰仍然具有这一特征。(C)为脂质偶联ASO LC-MS标准品的质谱图,其中两个峰的质量数信息相同。去卷积质谱图所示为中性分子质量数为6046~6047 Da的完整寡聚物和少量质量数为6031 Da的氧化物质。

想了解更多脂质偶联ASO LC-MS标准品的信息,请

【维护和使用手册】沃特世脂质偶联ASO LC-MS标准品

应用纪要 | 开发基于试剂盒的标准化方法用于从生物基质中选择性且可重现地进行治疗性寡核苷酸的样品前处理和萃取

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