惊！都2024了还有人不知道儿茶酚胺怎么分析嘛

2024-01-23 10:43:10, 王静艾杰尔-飞诺美（Agela & Phenomenex）

嗜铬细胞瘤及副神经节瘤（PPGL）是一种能够引起内分泌性高血压的少见神经内分泌肿瘤，在普通高血压门诊中患病率为0.2%-0.6%，在儿童高血压患者中为1.7%。PPGL患者的主要临床表现为儿茶酚胺（catecholamine, CA）类物质分泌增多，进一步导致高血压及心、脑、肾血管并发症和代谢性改变，在经准确诊断后，可通过手术治疗，属于一种可治愈的继发性高血压。

CA是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质，是人体内重要的神经递质和激素，包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)。CA在儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的作用下生成变肾上腺素类物质（metanephrines, MNs），主要包括甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3-甲氧酪胺(3-MT)。在《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识（2020）》中，推荐：诊断PPGL的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)浓度测定；建议：可同时检测血或尿NE、E、DA及其他代谢产物3-MT等浓度以帮助诊断。

艾杰尔飞诺美拥有完整的血浆中6种儿茶酚胺类物质的分析方案，全力助力相关研究，具体细节如下：

样品制备

预处理：

取350μL血浆，加入10μL标准品溶液及10μL内标溶液，涡旋震荡1min，加入350μL 50mM乙酸铵溶液，涡旋震荡1min，待净化。

固相萃取 (SPE)：

前处理耗材：Cleanert PWCX 96 Well Microplates (5mg/mL)

活化：依次使用200μL甲醇，200μL 25mM乙酸铵溶液进行活化

上样：将预处理的样品全部上样

淋洗：依次使用400μL 25mM乙酸铵溶液、400μL乙腈进行淋洗

洗脱：使用100μL 5%甲酸乙腈溶液对孔板两次洗脱

氮吹复溶：将2次洗脱溶液涡旋并在37℃下氮吹，然后使用100μL初始比例流动相复溶，并涡旋1min后进样检测

色谱条件

色谱柱：Phenomenex Kinetex F5 (2.6μm, 3.0×100mm)

流动相：A含甲酸的水溶液，B含甲酸的甲醇，梯度洗脱

流速：0.4mL/min

柱温：40℃

质谱条件

电离方式：电喷雾离子源，正离子

检测方式：多反应监测 (MRM)

离子源温度 (TEM)：500℃

辅助气 (Gas2)：40psi

电喷雾电压：1500V

雾化气 (Gas1)：60psi

气帘气 (Gurtain Gas)：30psi

表1. 6种儿茶酚胺类化合物典型标准曲线

*单位：ng/mL；本实验条件下，统一配置标准曲线范围如表所示，具体曲线范围可根据真实需求调整

图1. 6种儿茶酚胺类化合物典型色谱图

图2. 6种儿茶酚胺类化合物低、中、高浓度水平加标回收率

产品类别	产品名称	货号
前处理耗材	Cleanert PWCX 96 Well Microplates (5mg/mL)	WC00501-MW
色谱柱	Kinetex F5（2.6μm, 3.0×100mm）	00D-4723-Y0