2023-11-25 13:56:13, 上海应用部 月旭科技(上海)股份有限公司
在液相色谱方法开发过程中,色谱柱对于分离效果的影响是最大的。色谱柱的参数包括:键合相、柱长、直径、粒径、孔径。
做过液相的工程师肯定都深深记牢这句口诀:
● 同等长度的色谱柱,粒径越小,分离效果越好;
● 同等粒径的色谱柱,长度越长,分离效果越好;
● 同等粒径的色谱柱,内径越小,最佳的体积流速越小。
那么,在相同的方法条件下,同等长度的色谱柱,粒径越小,分离效果一定越好吗?小编带您在实操中一探究竟。
(图片来源:baotu)
案例一:儿茶酚胺及代谢物的测试
儿茶酚胺即含有邻苯二酚(即儿茶酚)结构的胺类化合物,包括多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素及它们的衍生物。
图1 Xtimate® C18(2.1*100mm,1.8μm)
测试儿茶酚胺及代谢物
图2 Xtimate® C18(2.1*100mm,3μm)
测试儿茶酚胺及代谢物
在LC-MS(液相色谱串联质谱)检测时,肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、甲氧基肾上腺素(MN)和甲氧基去甲肾上腺素(NMN)这5个物质极性较大。
在月旭Xtimate® C18(2.1*100 mm,1.8μm)规格的色谱柱上保留均较弱(图1)。尽管DA和MN在质谱上可以分离,但DA和MN色谱上未能分离,在临床测试中,我们还是希望代谢物在色谱上也能分离。
在相同的条件下,仅更换使用Xtimate® C18(2.1*100mm,3μm)规格的色谱柱,5个物质保留均增加,在色谱上达到完全分离(图2)。
案例二:某杂质A和杂质B的分离
图3 AQ-C18(4.6*250mm,3μm)
测试杂质A和杂质B
图4 AQ-C18(4.6*250mm,5μm)
测试杂质A和杂质B
从上两图中可以看出,在方法不做大的调整情况下,使用月旭AQ-C18(4.6*250mm,3μm)规格的色谱柱,杂质A和杂质B之间的分离度仅达到1.2(图3)。经过多种方法的优化,杂质A和杂质B的分离度仍徘徊在1.2左右。
更换月旭AQ-C18(4.6*250mm,5μm)规格的色谱柱,仅调整流速,杂质A和杂质B之间的分离度达到1.6(图4),满足分析要求。
原理分析:
Van Deemter方程第一项即为涡流扩散项。色谱柱中充满了固定相填料,而这些填料的存在会阻碍溶质分子运行,填料粒径越大,溶质分子“绕行”距离就越远,即在填料孔径中停留的时间就越长。
在案例一中:儿茶酚胺类物质属于强极性物质,在色谱柱上保留弱。在相同填料、相同内径和长度的色谱柱以及检测条件下,相同流速的流动相对保留在3μm粒径的UHPLC色谱柱上的儿茶酚胺类物质的洗脱能力比1.8μm粒径的UHPLC色谱柱的要弱,所以达到了分离度增加的效果。
在案例二中:色谱柱均为4.6*250mm规格的色谱柱,仅粒径不同。该规格下5μm粒径的色谱柱最佳流速为1mL/min,3μm粒径的色谱柱最佳流速需要达到1.67mL/min,而这个流速下的压力已经超过HPLC的耐压值,故无法采用最佳流速。最终,5μm粒径的色谱柱使用的是最佳流速1mL/min,3μm粒径的色谱柱仅使用0.8mL/min的流速,远低于最佳流速,故分离效果并没有5μm色谱柱好。
经过以上两个案例,对于较难分离的分析物,小伙伴们如果尝试多种方法仍未达到令人满意的分离效果,不妨尝试把色谱填料的粒径改大或改小,都可以试试,可能会有意想不到的效果哦!
作者:韩燕
排版:赵林
审核:邹天骏
如果您想了解更多内容,欢迎联系月旭科技销售人员或拨打400-810-6969服务热线,我们将竭诚为您服务。
推荐阅读
企业战略定位
中国领先的色谱填料、色谱耗材和仪器制造商
色谱分析和分离纯化整体解决方案供应商
色谱实验用品一站式供应商
企业文化
企业·使命
让公众的饮食健康更有保障
企业·精神
积极开拓进取,努力创造价值
企业·理念
极限的性能,合理的价格,最好的服务
企业·价值观
客户优先,团队至上
学习创新,攻坚克难
诚信尽责,红利共享
02-27 飞飞
“第七届成都生物医药创新者峰会”倒计时8天!02-27
原子力显微镜新技术陪您迎新春!02-27
水质分析提升必备,专家联合系列课程免费学习!02-27
【水分仪动态】普利赛斯EM系列水分仪轻松检测隐形眼镜含水量!02-27 小普
特洁安TrojanUVFlex助力国内净水厂升级改造,保障10万居民生活用水安全02-26 特洁安
【会议邀请】微纯生物科技邀您参加“CDIC2024第十届中国药品检验技术大会”02-26 微纯市场部
色谱耗材 | 开学新动态 好价齐护航02-26 开学有礼的
用户培训丨2024年天美色谱用户培训班计划02-26 天美色谱
激光反射镜产品介绍02-26 韵翔光电
净水映花灯,诸事皆圆满|哈希祝您福满元夕!02-24
【元宵祝福】Precisa普利赛斯祝您元宵节快乐!02-24 小普
元宵节|山河春醒,喜闹元宵!02-24
赛里安在此祝福您及家人朋友们平安喜乐, 元宵节快乐!02-24 天美色谱
元宵有礼|“龙”重登场!看BAC系列大电池参与节日红包大派送02-23
岁月最美是陪伴,人间至味是团圆!艾捷博雅祝大家元宵节快乐!02-23
猜灯谜 | 龙行龘龘迎佳节 喜闹元宵赢好礼02-23
天美生命科学实验室设备祝您元宵节快乐!02-23 天美生化
〔科学技术研究项目评价〕系列标准介绍——GB/T 41619-2022 基础研究项目评价实施指南02-23
Cytiva祝大家元宵节快乐!安康常在,诸事圆满!02-23