AP/MALDI 质谱成像 Q&A 第3期

2023-11-24 15:43:14, 华质君华质泰科生物技术（北京）有限公司

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AP/MALDI 大气压基质辅助激光解吸电离源与各种质谱分析器相连，适于多肽、蛋白、核酸、唾液酸神经节苷脂、低聚糖、表面活性剂、聚合物大分子，以及经典的生物大分子如蛋白质、多肽、寡核苷酸、寡糖、脂类，微生物等的原位、直接分析。更媲美真空 MALDI 进行质谱成像，最高空间分辨率达 5 μm（微米）以下。

# 蛋白相关

1、AP/MALDI 是否可以用于蛋白质组学研究或单细胞研究？如果是，可用于检测的最小细胞数是多少？

AP/MALDI 可用于蛋白质组学应用（自下而上的方法），我们的一些用户正在使用 AP/MALDI 进行单细胞代谢组学和肽组学研究，预计很快就会看到一些出版物。如果您对 AP/MALDI 技术感兴趣，我们可以替您联系相关用户。

2、AP/MALDI 也可以用于蛋白质成像吗?有多少种蛋白质可以同时成像?有可能在同一组织切片上实现这些成像吗?

蛋白质消化物或天然肽可以用 AP/MALDI 成像。已有论文展示了不同的天然神经肽可以从同一组织中成像。

详见 https://link.springer.com/protocol/10.1007/978-1-0716-3319-9_16

3、小分子、药物和蛋白质能否同时在组织切片上成像?

理想情况下，建议使用连续切片成像多肽和药物/小分子。药物和代谢物可以同时成像，脂质和药物也可以。与小分子和药物相比，肽成像需要不同的工作流程。已有论文对同一部分的神经肽和脂质进行了成像分析。

详见 https://doi.org/10.1038/s41467-019-12548-0

4、AP/MALDI 与真空 MALDI 相比，对蛋白或其他大分子的分析，是否有倾向性？

MALDI 的原理目前并没有被研究的很透彻，具体哪些物质在 AP/MALDI 或者真空 MALDI 里检测的更好，目前没有明确定论，从目前发表的文章数据来看，AP-MALDI 和真空 MALDI 的检测结果具有重叠性，也具有互补性（具体细节可联系后台获取相关文献）。

# 激光相关

5、AP/MALDI 校正激光位置的时候，如何评估校正结果，有无一套固定标准？

可以通过在样本中单击导航到对应样本点来验证自定义样本是否对齐。红十字中心应位于相应斑点的中心，以便完全对齐。如果激光点很好地击中样品或在整个样品中有效地斑点，则不需要坐标校正。

也可以通过测量施加在 MS 进口毛细管和 MALDI 靶板之间的电压上的离子信号强度来检查是否有良好的激光光斑对准。当电压从 500 V 增加到 2500 V 时，如果调整得当，信号强度单调增加。

6、目前激光能量的大小是用百分数表示，如何换算到具体的功率，比如 kJ？

通过调整激光光斑大小来增加激光能量，即照射光斑的单位面积能量（J/cm2）（能量/面积）。

7、MS 的扫描速度与 AP/MALDI 激光频率如何匹配？

对已经设定好的质荷比范围，可以算出质谱一张扫描时间，再去匹配对应的激光频率。从化合物浓度的角度来说，浓度比较低时建议也使用较低的频率，浓度比较高的情况下可以适当调高频率。

8、激光器的波长有什么影响？

不同的基质对不同波长的激光吸收能力不同。

# 软件相关

9、是否需要配套成像软件？以及与其他成像软件的区别？配套成像软件的优势有哪些？

软件很重要，AP/MALDI 的配套软件 Mozaic 可以兼容更多类型的数据，是目前唯一兼容 Fullscan、MRM，且能够识别多种格式的软件。Mozaic 除质量校正外还具有基线校正、噪音消除、数据归一化的功能，此外还能处理 Tb 级别的数据集。

# 与真空 MALDI 的区别

10、AP/MALDI 与 MALDI-TOF 有数据互补的例子吗？

已有文章，点击：Science Advances丨单细胞空间代谢组学发现腿部罕见“超快肌纤维”查看。

11、真空 MALDI 据说不适合小分子，但 AP/MALDI 据说可做小分子？

真空 MALDI 有着常见基质固化的问题，在500 Da 分子量范围内存在基质干扰的现象。起初真空 MALDI 做大分子，LCMS 做小分子，真空 MALDI 发展不大，因为真空 MALDI 与质谱一体机的设计很难改变。而 AP/MALDI 对小分子优秀，因为后端可连高分辨率质谱。

# 其他

12、质谱成像数据如何辨别假阳性结果，识别出由于实验过程本身造成的代谢物的异质性分布？

可通过加入多种同位素内标，再通过归一化准确反映目标化合物在切片表面的定量信息（具体细节可联系后台获取相关文献）。

13、AP/MALDI 实验流程过程中哪些参数可能影响实验结果，这些参数的先后优化顺序一般是什么？

实验结果影响最大的因素，依然是，样品制备效果。如，基质是否均匀喷涂（用好的喷涂仪）、基质与样品共结晶是否均匀、基质是否匹配待测分子性质（很多文献已经提及这个方面）。离子源的影响因素不是很多，不需要过度调整源的参数。通常，APMALDI 的激光能量在5-15%（脂质及代谢物等等）或1-10%（多肽等）够用，即小于15% 即可；不必过度优化能量（能量过高会引致源内裂解造成背景离子增多、灵敏度下降及不必要的寿命减损）。调节激光能量、频率和扫描（样品盘）速度时，需只调整一个变量，其余变量固定。对于理化性质较为特殊的化合物，可个性化地调节质谱离子入口端的毛细管的温度和电压参数。

14、AP/MALDI 灵敏度如何，是否有利血平或者其他标准品的测试数据？

检测限：1 fmol/样品（缓激肽）（通常）。

15、安装 AP/MALDI 是否需要支架？

AP/MALDI 可直接搭载在质谱前端，不需要支架辅助。

16、兼顾灵敏度和分辨率时多少适宜？

不同型号的质谱的灵敏度不同、不同的化合物的电离效率也不同，需要具体实验结果具体分析。

17、靶板上必须施加电压吗？

是否需施加电压与质谱型号相关。

18、三维重构如何做?

多切片进行二维成像，再通过数据重构建立三维成像。

19、如何确定切片位置？

根据组织的解剖学结构，按照特定的方向进行修片，直至我们关注的区域出现，最后可通过 HE 染色的方式确认结构。