寡核苷酸药物

寡核苷酸药物对比于小分子药物及蛋白药物，具有多方面的优势，首先可根据目标靶点设计碱基序列，靶点明确、特异性强；其次寡核苷酸药物从转录后水平进行治疗，可选择的靶点丰富，特别是能覆盖蛋白质不可成药的靶点以及开发由基因缺陷导致的遗传性疾病的相关靶点；另外寡核苷酸药物由于序列短，可采用化学合成方法，完成目标序列的装配，并结合生物学测试筛选有效序列，能够避免盲目开发，节省研发时间。

目前寡核酸药物大多通过固相亚磷酰胺化学法进行合成。化学合成按照3''-5''的方向进行。

固相合成每个循环主要包括四个步骤：去保护、偶联、氧化和加帽。合成中产生的杂质（包括最后的脱保护）有以下几种类型：

截短的序列（shortmer sequences）N-X，如N-1，N-2；

更长的序列（longmer sequences）N+X，如N+G，N+A；

硫代磷酸酯键（PS）产生的非对映异构体和氧化产生PO杂质；

胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶脱氨基引起的杂质；

其他杂质，如碱基脱嘌呤杂质、2''-5''连接异构杂质、序列异构体等

典型的链长度范围为20~80个核苷酸，合成规模从毫微克到公斤，取决于其用途。尽管寡核苷酸的合成过程非常高效，合成过程也会产生相应数量残缺的寡核苷酸序列及其它与工艺相关的改进和杂质。分析所合成的产品、测定其纯度至关重要。合成产品的控制分析和成品分析对设计研究的质量和工艺控制都很有用。

固相化学合成工艺及低聚物分子的多样性，给分析表征工作带来高度的挑战性。ACQUITY UPLC系统将色谱分析的性能、分辨率、灵敏度及通量等方面提到了新的高度，其能够使实验室效率更高。

寡核苷酸在细胞外稳定性低，易被核酸酶降解，加上分子量及负电荷的因素，难以进入细胞，因此在研发过程中，使其保持稳定的结构以及能够有效递送的传递载体是主要考虑的两个因素。寡核苷酸核酸分子的改造主要包括磷酸骨架，碱基以及糖环的修饰，在改造中需要考虑多个因素，包括稳定性、药代动力学、碱基配对的亲和力等，最重要的是能够保留被功能酶及功能蛋白所识别的功能。因此，在前期研发过程中，需要对寡核苷酸进行精确的结构表征及定量。高分辨质谱可以进行核酸修饰和杂质的定性定量分析，以及核酸序列确认等更加深入的表征分析工作。

目前国内对于寡核苷酸的法规还未公布，我们参考FDA《寡核苷酸疗法开发的临床药理学注意事项》的指南草案

本《指南》提供了帮助行业开发寡核苷酸疗法的建议，包括药代动力学、药理学和安全性评估：1）表征QTc间期延长的可能性；2）进行免疫原性风险评估；3）表征肝肾损害方面的影响；4）评估药物-药物相互作用的潜力

寡核苷酸疗法包括多种合成修饰的RNA或RNA/DNA 杂交体，专门设计与目标RNA序列结合，以改变RNA和/或蛋白质表达。在这种治疗模式（therapeutic modality）下，各类寡核苷酸疗法也在多个方面有所不同，包括但不限于:

作用机制（如剪接调节、RNA干扰、RNase H介导的切割）

结构（如单链RNA、双链RNA、RNA/DNA 杂交体）

碱基和/或骨架的化学修饰

大小

序列

递送策略【如脂质纳米颗粒（LNP）、脂质体、其他聚合物纳米颗粒、聚乙二醇(PEG)、N -乙酰半乳糖胺(GalNAc)】

是否存在其他部分（如小分子、蛋白质、抗体）

本《指南》中的建议一般适用于以RNA为作用机制中心（RNA-centric mechanism of action）的寡核苷酸疗法。以直接调控蛋白质为作用机制（如适体）或以免疫刺激为作用机制（如TLR9激动剂）的寡核苷酸疗法不在本《指南》的范围内。FDA鼓励申办方在pre-IND或IND阶段与适当的审评部门沟通，讨论这些疗法的开发。