2023-10-12 19:22:13, 沃特世 沃特世科技(上海)有限公司
三羧酸TCA循环,也被称为克雷布斯循环或柠檬酸循环,是新陈代谢的核心过程。该循环的组分主要为小分子极性羧酸,这些化合物可能存在分子量低、基质提取物复杂以及稳定性的问题。此外,对于含有富电子基团的化合物(例如羧酸和磷酸),它们还会与金属表面发生相互作用,这会导致分析灵敏度下降和色谱峰形变差,从而增加了测定TCA循环中化合物的难度。在传统的反相液相色谱条件下,这些化合物的保留效果并不理想。
如何让三羧酸循环中相关物质的测定更为精准?下面,小编就给大家介绍一种利用MaxPeak Premier色谱柱提高三羧酸循环相关分析物的分离效果和回收率的方法。
本研究采用ACQUITY Premier CSH Phenyl-Hexyl色谱柱分离和检测尿液中15种TCA循环相关代谢物,化合物的名称、保留时间和结构如下:
实验结果
1.
两组关键分析物对(柠檬酸/异柠檬酸、苹果酸/富马酸) 实现色谱分离,有助于确保测量结果可靠。
图1. 关键分析物对(柠檬酸/异柠檬酸、苹果酸/富马酸)的分离结果。
2.
含有富电子基团的化合物(例如羧酸和磷酸)的峰回收率显著提高,特别是3-磷酸甘油酸的峰回收率。
图2. 使用ACQUITY PREMIER CSH苯己基色谱柱分析尿样中异柠檬酸和柠檬酸、苹果酸和3-磷酸甘油(3-PG)酸得到的峰回收率。
结论
CSH颗粒基于沃特世亚乙基桥杂化(BEH)颗粒技术,表面带有少量电荷,可改善低离子强度流动相中碱性化合物的上样能力和峰形,同时保持BEH颗粒技术固有的机械和化学稳定性。本研究介绍一种能够兼容MS的混合模式液相色谱方法,采用ACQUITY Premier CSH Phenyl-Hexyl色谱柱分析TCA循环分析物以及其他相关化合物,无需进行样品衍生化或使用离子对试剂。该方法结合MaxPeak高性能表面(HPS)技术,可减少分析物在色谱分离过程中的吸附和损失,关键分析物对实现分离,大大提高回收率,使得这些分析物更容易被准确地检测和测量。
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