关注仪器性能，提高工作效率 | 高效液相色谱性能评估

2023-10-12 19:22:13, 沃特世沃特世科技（上海）有限公司

在仪器使用时，有时会出现昨天还能正常实验，今天就无法工作的现象。因此，监测对应仪器指标十分重要。当指标出现异常时，需要及时采取措施，对潜在故障尽早干预，避免延误造成宕机，否则不仅增加维修成本，还耽误项目进展，影响数据可靠性。

接下来，我们就瞄准液相的主要组成部分：泵、进样器和检测器，来看看哪些指标是我们需要持续关注的。

溶剂管理器（泵）

指标1：

样品峰保留时间的相对标准偏差（连续6针RT RSD%）

接受范围：

RT RSD%≤1.0%

指标2：

系统压力

接受范围：

稳定合理

泵为系统提供稳定的流速及比例，以确保分析成分在经过色谱柱选择后获得稳定的分离重现性。保留时间越稳定，则分离重现性越好。泵的功能是否正常，最直观的表现就是压力。

我们可以保持良好的使用习惯，即时记录方法正常运行时泵的压力，当发现压力异常时，就可以及时检查。这里需要强调一点，很多人认为只要保留时间稳定，仪器状态就一定没有问题，不需要观察压力指标，其实这样的理解是有偏颇的，比如当我们的系统压力整体升高100 psi或200 psi的时候，可能在保留时间的表现上并不明显，但其实，此时如果任由压力持续升高，就势必演变成较难处理的情况。

影响系统压力因素：

流动相：不同类型，不同配比的流动相，在系统中的压力是不一样的，例如，同样是甲醇:水=50%:50%时，同等系统条件下压力最高，此时增加甲醇或水的含量都会使得系统压力降低；
色谱柱温度：温度升高，压力降低。由于暴露在外的色谱柱，系统压力极易受到实验室环境温度变化的影响。因此，启用柱温箱、设定合理的温控，都有助于保持压力稳定；
管路：管路的内径影响系统压力的大小，内径越小，反压越大。通常来说进样器之后的管路，为防止样品扩散，都会采用内径最细的管路，在自行更换时一定要注意，如果误选大内径管路，不仅会使系统压力降低，更会使得样品峰展宽，影响最终计算结果。

进样系统（进样器）

指标：

峰面积重现性（连续6针Peak Area RSD%）

接受范围：

Peak Area RSD%≤1.5%

进样器是吸取样品的装置，峰面积重现性越好则定量越准确。在进样器上同样有一个常见误区：当峰面积RSD偏大时，许多人会认为是进样器异常导致的，实际上若进样器功能完好而仅泵输液异常时，保留时间不能重现，也会导致峰面积RSD偏大，只有泵与进样器正常协同工作才能做到良好的峰面积和保留时间重现性。

影响进样准确性因素：

注射器里有气泡：气泡有可能是在更换流动相时未能做到完全平衡系统，或脱气不好造成的，一旦进样器的注射器里有气泡，会降低进样量，影响峰面积；
洗针液：应根据当前样品选择适当溶剂，而非一成不变的“固定“溶剂。这样才能有效去除样品在进样针上的残留。同时也应关注洗针液的消耗是否正常，及时补充；
色谱柱的接头：这两个接头是整个色谱系统中最常使用的、磨损最快的，需要定期更换。另外，安装时也应注意管路连接要到位，避免死体积产生峰形展宽，影响计算结果。

检测器

指标1：

灯使用寿命

接受范围：

≤1年或2,000小时

指标2：

灯能量（紫外型检测器）

推荐正常值：

双波段紫外检测器230 nm参比能量≥20

PDA检测器230 nm能量值≥5000

检测器最需关注的点就是检出限，检出限归根结底就是信噪比（S/N）。噪音(N)强或者信号（S）弱都会导致检出限偏低，特别是有关物质的检测对这个要求更是严苛。检测器状态很大程度决定了我们的方法检出限和定量限，因此方法开发时检测器的状态确认非常必要。

影响检测灵敏度因素：

灯源：作为检测器的能量来源，直接影响信号检出结果。同时灯源也是消耗品，随使用时间，甚至放置时间，都会有能量损失。定期关注能量指标，会对灯源的状态有比较直观的了解。正常使用的灯，推荐一年更换一个；
检测池：其清洁程度直接影响检测结果；
光学部件：在光源的长期持续照射下光学部件会产生光蚀，影响光传递。另，当有灰尘附着在光学部件的表面，也会影响光强度，而在这些光学部件高强度的照射下，灰尘会被烧结在其表面，几乎无法进行清洁处理，只能更换。因此，保持实验室的环境卫生很重要。