使用疏水填料TOYOPEARL PPG-600M纯化抗体药物偶联物

本研究中使用的抗体是Humira^®阿达木单抗的生物类似药。ADC模拟物由荧光素-5-异硫氰酸酯通过赖氨酸基团与抗体进行异质、随机偶联而成。

将ADC模拟物进样至装填有TOYOPEARL PPG-600M填料的层析柱中，按低、中、高DAR值分离ADC模拟物片段（图1）。

在TSKgel Butyl-NPR色谱柱上对每个洗脱步骤的洗脱溶液进行了分馏和分析，并计算UV-DAR估值（图2）。

由于耦合的随机性和异质性，我们发现DAR值的变化范围较大，为0-6。因此，ADC的纯化过程也比定点ADC分离更为复杂。

尽管如此，TOYOPEARL PPG-600M填料在分级梯度中仍然具有足够高的选择性，能够将ADC偶联物按低、中、高三组不同的DAR进行分离。低DAR片段的DAR均值为1，中DAR片段为3，高DAR片段的DAR中值为5。

所有获批ADCs的DAR值均介于2-4之间。在分级梯度期间微调浓度，可以调整该过程以分理处目标DAR范围内ADCs。