【应用分享】保健食品中免疫球蛋白IgG的提取与检测

2023-05-03 11:34:56, 纳谱分析纳谱分析技术（苏州）有限公司

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免疫球蛋白G / IgG 图源于网络侵删

免疫球蛋白是指具有抗体活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白，其中，免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它在抗感染过程中起到主力军的作用，它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用、中和细菌毒素的毒性、与病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力。

因免疫球蛋白IgG特定的功能活性，将免疫球蛋白IgG添加到食品中以期获得提高人体免疫力的方式成为保健食品发展的新趋势，一般情况下保健食品中免疫球蛋白IgG添加量较大，参照团体标准T/SSFS0002-2021乳及乳制品中免疫球蛋白IgG的测定（高效液相色谱法）可以完成对保健食品中免疫球蛋白IgG的定性与定量，但需要对提取方法进行适当调整，本文选择了3种免疫球蛋白IgG含量较高的样品，使用纳谱分析的SelectCore Protein G亲和柱对样品进行亲和固相萃取，再使用纳谱分析的BioCore SEC-300色谱柱对样品进行含量与加标回收率的测定，为保健食品中免疫球蛋白IgG含量测定的方法提供参考。

适用范围

本方法参照T/SSFS0002-2021 团体标准乳及乳制品中免疫球蛋白IgG的测定（高效液相色谱法），适用于保健食品中免疫球蛋白IgG的提取与检测。

实验步骤

一 / 试剂配制

0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH6.5）：称取4.11 g无水磷酸二氢钠，2.23 g无水磷酸氢二钠，加水溶解并定容至1 L，摇匀备用。

乙酸溶液（pH3.0）：准确吸取3 mL冰乙酸，加水定容至1 L，摇匀备用。

150 mmol/L氯化钠溶于20 mmol/L PBS缓冲溶液中（pH7.0）：称取0.91 g无水磷酸二氢钠，1.76 g无水磷酸氢二钠，8.77 g氯化钠，加水1000 mL溶解，摇匀过膜备用。

二 / 样品制备

称取样品0.5 g（精确到0.001 g）置于50 mL离心管中，用0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液适量溶解，常温充分震荡提取5分钟，将溶液转移到50 mL容量瓶中，用少量0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶洗涤离心管至少2次，定容至刻度，摇匀，将溶液转入离心管中，于4 ℃ 1000 r/min离心10 min，去除脂肪，重复操作1次，取下层澄清液备用。

三 / 样品前处理

SelectCore Protein G亲和柱：

（1）活化：依次使用5 mL水、10 mL 0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液活化；

（2）上样：取2中制备好的下层澄清液5 mL上样至亲和柱上，弃去流出液；

（3）淋洗：使用5 mL 0.05 mol/L磷酸盐缓冲溶液淋洗，弃去流出液；

（4）洗脱：用4 mL乙酸溶液洗脱，收集全部流出液，用乙酸溶液定容至5.0 mL，过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱检测分析用。

四 / 高效液相色谱法测定

Column：BioCore SEC-300，5 μm

Dimension：4.6×250 mm

Mobile Phase：150 mmol/L氯化钠溶于20 mmol/L PBS缓冲溶液中（pH7.0）

Flow rate：0.35 mL/min

Temperature：30 °C

Injection：10 μL

Detection：UV 214 nm

实验谱图

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图 1 免疫球蛋白IgG标准品、样品1、样品1加标对比图

图 2 免疫球蛋白IgG标准品、样品2、样品2加标对比图

图 3 免疫球蛋白IgG标准品、样品3、样品3加标对比图

加标回收率

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五 / 实验结果及讨论

由图1、2、3可知，SelectCore Protein G亲和柱可以特异性的结合免疫球蛋白IgG，并且BioCore SEC-300色谱柱可以有效分离杂蛋白与IgG；由表格可以看出，三种保健食品的加标回收率均在90%以上。

经过测试，SelectCore Protein G 1 mL亲和柱的柱容量为5 mg/支，对于IgG含量较高的样品，推荐IgG最佳上样的物质的量为1 mg，为了避免亲和柱过载，可以通过减少样品称样量和上样体积来进行适当调整。

相关产品信息

常规规格货号
产品描述	货号
SelectCore Protein G亲和柱 1mL; 20/pkg 盒	PTG065-030001-1M
BioCore SEC-300色谱柱 5μm, 4.6×250mm	B213-050030-04625S