【应用分享】Glycoworks N-糖试剂盒助力N-糖定量分析
2023-04-23 16:09:01, 沃特世 沃特世科技（上海）有限公司
糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，在糖苷酶的催化下，将对应糖链转移到蛋白质上形成的。根据糖基化发生的化学键类型，可将蛋白糖基化修饰主要分为N-糖基化和O-糖基化。
N糖链和蛋白质的天冬酰胺的自由基-NH2共价连接，这种糖基化称为N-糖。N-糖的类型和含量会直接或间接影响蛋白的生物学活性，免疫原性以及半衰期等。
针对N-糖定量分析，沃特世使用
Glycoworks
RFMS N-糖试剂盒结合荧光检测器建立了单抗中G0F含量测定标准，结果如下图所示：
1.
相同体积，不同浓度的蛋白建立线性。
标曲5点：0.8 mg/mL、1.4 mg/mL、2.0 mg/mL、2.6 mg/mL、3.2 mg/mL（相当于标准浓度的40%、70%、100%、130%、160%）
2.
每个浓度制备3个平行样，以标准中的进样体积为100%，各进样1针，建立体积 — 峰面积标准曲线，取平行样的平均值。
所需的样品制备试剂盒和样品前处理注意事项
Glycoworks RFMS N-糖试剂盒为游离N糖分析设计了快速精简的工作流程，不仅使N-糖检测具有了前所未有的荧光和质谱性能，还大大提高了样品制备的通量，是生物制药实验室一直期待的精简化操作流程。
1.
适当延长变性、酶解、标记的时间，建议延长时间是标准方案中的2倍；
2.
样品进行纯化时，控制真空泵压力，控制样品流速，匀速流出；
3.
由于每个样品试剂取样量较少，需操作一致，避免取量差异大造成重现差。
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