亮点满满！丨MauriceFlex™组分收集和下游质谱鉴定实验解读

MauriceFlex™是最新一代Maurice™家族产品，具备 icIEF 组分收集功能，能够实现icIEF模式多种样品的分离和制备回收。组分收集功能需使用MauriceFlex™卡盒进行等电聚焦，用以分离蛋白质电荷变异体。一旦聚焦和分离后，电荷变异体通过化学迁移方式，进而用于组分收集。

MauriceFlex™化学迁移原理展示（请点击）

与离子交换色谱(IEX)相比，MauriceFlex™组分收集更快速，可提供更高分辨率以及基于pI等电点的谱图，克服了在线直连cIEF-MS的一些局限性，例如需要配备专用接口以及背景电解质与质谱不兼容等问题。此外，离线组分收集以及从多个组分中汇集电荷变异体为质谱表征提供了更多的灵活性，灵活实现完整分子量、还原后分子量和肽图分析。

MauriceFlex™支持常规icIEF和CE-SDS分析。所有数据通过iCE软件处理（21CFR Part 11兼容）。icIEF和CE-SDS双模式符合2020版中国药典。

通过使用MauriceFlex™对NIST mAb（RM 8761）进行icIEF组分收集以及质谱鉴定实验，已证实：

图1  NIST mAb分析型（A）和组分收集型icIEF图谱（B）

MauriceFlex™组分收集方法可以基于Maurice™ icIEF分析方法快速建立。使用Maurice™分析型和MauriceFlex™组分收集型卡盒对NIST mAb进行icIEF分离。我们鉴定了NIST mAb的5个电荷变异体(B2、B1、M、A1、A2)，并获得了它们的相对丰度(图1A)。两种图谱显示电荷变异体数量相同。每个变异体的相对丰度(%)是根据分析型图谱(A)中的峰面积计算的。

图2 Maurice™ icIEF分析型实验对组分的电荷变异体进行鉴定和纯度验证

图2显示了含有最高纯度单个电荷变异体的icIEF电泳图，组分#10中除了低丰度(0.9%)B2的纯度为65%外，我们获得了4个电荷变异体纯度为100%的组分。

图3 LC-MS提供电荷变异体完整分子量分析

总离子流图(上)、质谱图(中)和去卷积谱图(下)

表1 完整分子量分析修饰汇总表

高纯度电荷变异体组分LC-MS完整分子量分析如图3所示，从去卷积质谱中鉴定出的每种电荷变异体的修饰如表1所示。鉴定结果与NIST mAb电荷变异体已知的修饰情况一致。

图4 B1和A1组分的肽图分析

表2 所有电荷变异体组分的轻链(LC)和重链(HC)序列覆盖

图4和表2展示了汇集10次后样本的肽图分析结果。结果表明，除了低丰度B2(相对丰度0.9%)和A2的重链(HC)外，其余电荷变异体的序列覆盖率均在90%以上。