麻烦么？不麻烦，室温5分钟定量你的蛋白

2023-02-21 13:09:17 赛默飞世尔科技生命科学产品

最近小编购入了一部新手机（是的，就是国产威武最近的那部），不说其他参数了，就一项技术就彻底的征服了我的心，那就是“快”充。

那，这个“快”到底有多快呢？

就是相当于我打开奇x说，才看了一集，手机就已经差不多满电了。（比起充电5分钟，通话两小时有了质一般的飞跃）

“快”对于现代人来说真的太重要了，而对于科研人更是如此，这不这几天我们隔壁实验室的小姜正苦恼于蛋白质定量，为此今天我就来和大家聊聊，什么叫做《只需5分钟，快速准确地定量蛋白质》~

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在蛋白质的提取、纯化和分析过程中，蛋白质的定量随处可见。

比如在裂解细胞之后，我们对各个样品中的蛋白进行定量，方便下游应用中的平行比较；而在蛋白电泳之前，我们也需要准确定量，以免精心准备的电泳（特别是2D电泳）抱憾而归。

鉴于不同的蛋白样品中可能存在各种各样的（干扰）组分，测定蛋白浓度的方法也有许多种。

对于未完全纯化的蛋白、低丰度蛋白或细胞裂解液的浓度测定，首选方法是在蛋白样品中加入定量试剂，在适当的波长下检测样品的颜色变化，并与已知浓度的对照蛋白质进行对比，即可测定蛋白质的浓度。

BCA法为什么成为经典？

BCA法是最常用的蛋白定量方法之一，在Google学术搜索中已有14万条结果。

与Bradford或Lowry等方法相比，BCA法对去垢剂的兼容性更强。它与多数离子型或非离子型去垢剂兼容，也是膜蛋白检测的首选方法。常用浓度的去垢剂，比如SDS、Triton X-100、Tween 20都不影响检测结果。

此外，BCA 法有着高度的均一性。相对于Bradford染料结合方法而言，不同蛋白质之间的变异性更小。BCA法还具有更高的线性度，它的线性范围是20至2000 µg/mL。即使是低至5 µg/mL的样品，通过改良操作也能够灵敏检测。

不过，有同学吐槽，“30分钟的孵育时间太长了”。的确，在核酸定量无需一分钟的前提下，蛋白质定量却要在37°C下孵育30分钟，或在室温下孵育2小时，的确显得太过漫长。如果经常要定量蛋白质，这个时间成本可伤不起。

快一点，再快一点

基于这个需求，赛默飞推出了全新Pierce™ Rapid Gold BCA蛋白定量试剂盒。顾名思义，它能够更省时。到底有多快？只需室温孵育5分钟，即可获得准确的定量结果。

图. Pierce Rapid Gold BCA试剂盒的检测流程

Rapid Gold BCA试剂盒的原理与标准BCA法相同，也是基于Cu2+的还原反应和BCA与Cu1+的螯合。不过，反应产物是橙金色复合物，在480 nm处有强烈的光吸收。与标准方法相比，它有着同样的线性范围，可以定量20至2000µg/mL的蛋白质。在去垢剂兼容性和定量均一性方面，它的表现也是同样出色。