2023-02-21 12:52:03, 赛默飞生命科学 赛默飞世尔科技生命科学产品
想要一次转印更多蛋白胶?
想要转印条件不一样也可同时进行?
想要获得更一致和更稳定的转印结果?
安排!
iBlot 3 快速蛋白转印系统是新一代的干式蛋白转印解决方案,采用即用型耗材,在iBlot 2 的基础上进一步优化性能,提高通量和使用便捷性。
图1. iBlot 3 快速蛋白转印系统
提高实验效率
iBlot 3 系统有两个独立控制的工作舱,同时运行两个不同的程序,同时完成总共 4 块小型凝胶( mini) 或 2 块中型凝胶(midi)的转印,实现设备的共享。系统内置多种预编程序,轻松选择,缩短方案设置时间。
图2. iBlot 3带有左右两个工作舱,每个工作舱可以同时转印最多2块mini胶或者块midi胶,两个工作舱可以运行不同的转印程序
图3. iBlot 3 设备可获得一致的结果。将连续稀释的HEK293 裂解物(在Thermo Scientific RIPA 缓冲液中裂解)加到四种Invitrogen ™ Bolt ™ 4至12% Bis-Tris Plus 凝胶上( 从左至右, 单位_g):10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0.078、0.039、0.020 和0.010。将Invitrogen ™iBright ™预染蛋白marker 加到最后一道。使用MES-SDS 缓冲液进行凝胶电泳。使用宽范围(30-250 kDa)预编程转印方法(25 V,6 min,低冷却),使用iBlot 3 快速蛋白印迹设备和iBlot 3 转印膜组(midi, NC),转印蛋白质。用Pierce 透明牛奶封闭缓冲液封闭印迹,然后使用抗表皮生长因子受体(EGFR)、钙网蛋白和p23 牛奶溶液的一抗孵育12 小时。在TBST 中制备二抗Invitrogen ™ GAR-Alexa Fluor ™ Plus 800 染料、Invitrogen ™ GAMAlexaFluor ™ Plus 488 染料和Invitrogen ™ GAChk-Alexa Fluor ™ 546 染料,加入到印迹膜中孵育2 小时。以上抗体孵育流程在Bandmate 自动化蛋白印迹处理器上完成。在iBright FL1500 成像系统上完成成像。注:GAChk = 山羊抗鸡
提高转印效率
新设计具有内置可调控冷却系统,可优化高分子量和低分子量蛋白的转印效果。
图4.iBlot 3 系统具有优异的转印效率。(A)Hsp70:Ivitrogen ™ NuPAGE ™ 4% 至12% Bis-Tris mini 凝胶,每孔加入梯度稀释的20、15、10、5、2.5、1.25、0.625 和0.312 g 的A431。电泳后,使用上述方法和条件转印蛋白质。使用Invitrogen ™ Bandmate ™自动化蛋白印迹处理器完成抗体孵育。使用Thermo Scientific ™ Pierce ™ 透明牛奶封闭缓冲液孵育印迹膜30 分钟。将Hsp70 一抗(1:1000 透明牛奶封闭液)加入印迹膜中,并在室温下孵育12 小时。去除一抗,将GAM-HRP 二抗(1:120000,TBST)加入印迹膜中,孵育2 小时。使用Thermo Scientific ™ SuperSignal ™ West Dura化学发光底物进行检测。使用Invitrogen ™ iBright ™ FL1500 成像系统捕捉图像。绘制每条泳道中裂解物条带的局部背景校正灰度图。(B)4EBP1 :Invitrogen ™ Novex ™ 16% Tricin mini 凝胶,每孔加入有10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 和0.078 g 的A431。电泳后,使用上述方法和条件转印蛋白质。使用Bandmate自动化蛋白印迹处理器完成抗体孵育。印迹与Pierce透明牛奶封闭缓冲液一起孵育30分钟。将4EBP1一抗( 1:1000透明牛奶封闭液)加入印迹膜中,并在室温下孵育12 小时。去除一抗,将GAR-HRP 二抗(1:175,000,TBST)加入印迹膜中,孵育2 小时。使用SuperSignal West Dura 化学发光底物进行检测。使用iBright FL1500 成像系统捕捉图像。绘制每条泳道中裂解物的局部背景校正灰度。注:GAM= 山羊抗鼠;HRP= 辣根过氧化物酶;TBST= 含Tween ™(溶液)的缓冲液;GAR= 山羊抗兔
结果一致且可重现
预组装的一次性耗材和超快速转印方法减少影响转印结果的变量,有助于确保结果的一致性和重现性。此外,具有内置冷却功能的全新坚固设计减少了热量积聚,提高了每次运行条件的一致性。
iBlot 3产品组合
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