No.233 | 《化妆品安全技术规范 2022年版》（征求意见稿）数据分享No.4

α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚

α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚，这四种物质均具有美白的功效，其中α-熊果苷、β-熊果苷为一对差向异构体。

使用CAPCELLPAKC18MGIIIS5;4.6×250色谱柱参考规范中的分析方法，可得到标准品和乳液、化妆水样品的良好分析结果。另外，根据α-熊果苷、β-熊果苷的化学性质，使用键合金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME-HR（金刚烷键合）色谱柱，在相同液相条件下能得到更好的分离效果，分析结果如图1所示。

图1  C18 MGIII和ADME-HR色谱柱

α-熊果苷、β-熊果苷对照品分析结果对比图

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250

            CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250

流动相：水 / 甲醇 = 95 / 5

流速：0.5 mL/min

柱温：20 °C

检测：激发波长：292；发射波长：337

样品：α-熊果苷20μg/mL,β-熊果苷10μg/mL  (溶剂为甲醇)

进样量：5 μL

图2  MGIII色谱柱分析结果-标准溶液

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

表1  MGIII色谱柱标准溶液积分结果表

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250

流动相：A，水；B，甲醇

B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)

流速：0.5 mL/min

柱温：20 °C

检测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318

样品：α-熊果苷2μg/mL，β-熊果苷2μg/mL，氢醌0.2μg/mL，苯酚0.4μg/mL (溶剂为甲醇)

进样量：5 μL

标准曲线

用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9997~1.0000，测试结果如表2所示。

表2  α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的

线性方程、线性范围和相关系数

回收率

按照规范方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验，α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20μg，氢醌添加量为2μg，苯酚添加量为4μg。对样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，分析谱图如图3和图4所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为91.3%~108.9%，回收率良好。

图3  化妆水样品和化妆水加标样品分析图

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

图4 乳液样品和乳液加标样品分析图

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250

流动相：A，水；B，甲醇

B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)

流速：0.5 mL/min

柱温：20 °C

检测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318

样品：称取样品1.0g（精确到0.001g），置10mL具塞比色管中，加入甲醇至10mL，在涡旋混匀器上高速振荡30s，使样品与提取溶剂充分混合。密塞，超声提取20min，静置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000r/min）5min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。

进样量：5 μL

图5  ADME-HR色谱柱分析结果-标准溶液

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

表3  ADME-HR色谱柱标准溶液积分结果表

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250

流动相：A，水；B，甲醇

B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)

流速：0.5 mL/min

柱温：30 °C

检测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318

样品：α-熊果苷2μg/mL，β-熊果苷2μg/mL，氢醌0.2μg/mL，苯酚0.4μg/mL (溶剂为甲醇)

进样量：5 μL

标准曲线

用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9998~0.9999，测试结果如表4所示。

表4  α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的

线性方程、线性范围和相关系数

回收率

按照规范方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验，α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20μg，氢醌添加量为2μg，苯酚添加量为4μg。对样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，分析谱图如图6和图7所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为88.4%~99.9%，回收率较好。

图6 化妆水样品和化妆水加标样品分析图

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

图7 乳液样品和乳液加标样品分析图

1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250

流动相：A，水；B，甲醇

B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)

流速：0.5 mL/min

柱温：30 °C

检测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318

样品：称取样品1.0g（精确到0.001g），置10mL具塞比色管中，加入甲醇至10mL，在涡旋混匀器上高速振荡30s，使样品与提取溶剂充分混合。密塞，超声提取20min，静置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000r/min）5min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。

进样量：5 μL

综上，参考《化妆品安全技术规范 2022年版》（征求意见稿）中的方法，使用CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250色谱柱可以得到α-熊果苷、β-熊果苷较好的分离，目标峰线性，回收率良好。

使用CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250色谱柱，对规范方法进行调整后，可得到良好分析结果，线性、回收率良好，同时α-熊果苷和β-熊果苷的分离度可达到3.58，并缩短了测试时间。

α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚 推荐用柱

F92635 CAPCELL PAK C18 MGIII S3; 2.0×150

F93375 CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6×250

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