肉制品胭脂红着色剂的测定（完全执行国标GB/T8695.6-2008）

1、适用范围适用于肉制品中胭脂红着色剂的测定。

2、提取步骤试剂的配置：1）硫酸溶液(V/V=1/9)；2）100g/L钨酸钠溶液；3）无水乙醇/氨水/水=7/2/1；4）200g/L柠檬酸溶液；5）取100mL的水，用柠檬酸溶液调节至pH =5.0提取过程：称取试样10g，均质器均质1min，然后加入20mL石油醚提取脂肪，超声5min，静止沉降2min后弃去石油醚，重复3次。吹干后加入10mL提取液（无水乙醇/氨水/水=7/2/1）提取胭脂红，边搅拌边过滤（用30mL带筛板的固相萃取空柱管进行过滤），重复提取3-5次，收集全部的提取液。70 ℃水浴旋蒸至10mL以下，加入1mL硫酸溶液和1mL钨酸钠溶液，继续70℃水浴加热5min，沉淀蛋白质，待其冷却至室温后，收集上清液，然后用3mL纯水洗涤沉淀后的蛋白质残渣，收集洗涤液，并将收集的上清液和洗涤液合并，待固相萃取柱净化。3、聚酰胺SPE柱净化步骤净化SPE柱：Welchrom® PA（聚酰胺）固相萃取柱（1g/6mL）活化：6mL纯水；上样：将提取步骤处理好的样品溶液过Welchrom® PA（聚酰胺）固相萃取柱，弃去上样流出液；淋洗：6mL pH=5的水，6mL甲醇/加酸（6/4），12mL纯水洗至中性；洗脱：6mL无水乙醇/氨水/水(7/2/1)，收集洗脱液。浓缩：将收集的洗脱液旋蒸至近干，加水定容至10ml，过水膜上机测定。标样配置：1 mg./ml胭脂红标准溶液，取50µl并用水定容至10mL注：浓缩后的溶液应用水系滤膜过滤，不能用有机系滤膜，因为有机系滤膜容易吸附胭脂红，从而损失回收率。

4、色谱条件色谱柱：月旭Ultimtae® XB-C18, 4.6×150, 5µm；流动相：甲醇：0.02M乙酸铵溶液，梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃检测波长：254 nm；进样量：20 µL

5、色谱图或者加标回收率结果

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