动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定

2022-11-16 16:47:34 月旭科技（上海）股份有限公司

（图片来源：包图网）

适用范围

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适用于牛、羊、猪和鸡的鸡肉、肝脏和肾脏组织中四环素类（四环素、金霉素、土霉素、多西环素）、磺胺类（乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噻唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异噻唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、酞磺胺噻唑）和喹诺酮类（诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸、氟甲喹）药物残留量的测定。（本实验样品采用鸡肉）

参考标准：《GB-31658.17-2021 食品安全国家标准动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱－串联质谱法》

提取步骤

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称取试料1g（准确至±0.01g），加Mcllvaine-Na2EDTA缓冲液8mL，涡旋1min，超声20min，-2℃、10000r/min离心5min，收集上清液，残渣中加磷酸盐缓冲液8mL，重复提取一次，合并2次提取液，混匀，备用。

SPE净化步骤

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SPE柱：月旭Welchrom^®BRP，

规格：200mg/6mL。

活化：5mL甲醇、5mL水，弃去；

上样：取备用液过柱，弃去；

淋洗：5mL水，5mL 10%甲醇水溶液，抽干；

洗脱：10mL洗脱液洗脱，压干并收集于离心管中；

复溶：将收集液体于45℃水浴氮气吹干，加复溶液至1.0mL，涡旋1min溶解残余物，14000r/min离心5min，过0.22μm滤膜，液相色谱-串联质谱仪测定。

色谱条件

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UPLC条件

色谱柱：Ultimate^® UHPLC XB-C18，1.8μm，2.1×50mm。

保护柱柱芯：Ultimate^® UHPLC XB-C18，超高压柱芯：2.1×5mm；

流动相：A： 0.1%甲酸水溶液；B：甲醇-乙腈溶液（2：8，含0.1%甲酸，体积比）；

柱温：35℃；

流速：0.3mL/min；

进样体积：2µL

梯度洗脱程序：见表1 。

表1 梯度洗脱程序

时间/min	A相/%	B相/%
0.00	95	5
2.00	85	15
5.00	60	40
7.00	5	95
7.10	95	5
9.00	95	5

质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；

扫描方式：正离子扫描；

检测方式：多反应监测（MRM）模式；

离子喷雾电压：5500V；

离子源温度：500℃；

气帘气（CUR）10psi；

雾化气（GS1）55psi；

辅助气（GS2）50psi。

其他质谱参数：见表2

表2 多反应监测模式（MRM）参数

化合物	母离子(m/z)	子离子(m/z)	碰撞能CE/V
四环素	445.1	410.2*	19
		427.2	13
金霉素	479.1	444.2*	24
		462.2	27
土霉素	461.1	426.2*	20
		443.2	13
多西环素	445.1	410.2*	19
		428.2	24
乙酰磺胺	215.0	156.0*	18
		108.0	11
磺胺吡啶	250.0	156.0*	25
		108.0	16
磺胺嘧啶	251.0	156.0*	27
		92.0	15
磺胺甲恶唑	254.0	156.0*	16
		92.0	26
磺胺噻唑	256.0	156.0*	25
		92.0	15
磺胺甲嘧啶	265.0	156.0*	28
		92.0	15
磺胺二甲异恶唑	268.0	156.0*	28
		92.0	16
磺胺甲塞二唑	271.0	92.0*	30
		156.0	15
苯甲酰磺胺	277.0	156.0*	22
		108.0	10
磺胺二甲异嘧啶	279.0	124.0*	21
		186.0	17
磺胺二甲嘧啶	279.0	186.0*	28
		92.0	16
磺胺间甲氧嘧啶	281.0	156.0*	31
		92.0	22
磺胺甲氧哒嗪	281.0	156.0*	30
		92.0	17
磺胺对甲氧嘧啶	281.0	156.0*	29
		92.0	17
磺胺氯哒嗪	285.0	156.0*	28
		92.0	15
磺胺邻二甲氧嘧啶	311.0	156.0*	32
		89.2	17
磺胺间二甲氧嘧啶	311.0	156.0*	32
		92.0	21
磺胺苯吡唑	315.0	158.0*	42
		92.0	28
酞磺胺噻唑	404.0	256.0*	32
		149.0	15
噁喹酸	262.0	244.0*	28
		216.0	18
氟甲喹	262.0	244.0*	32
		202.0	18
诺氟沙星	320.1	302.0*	25
		233.0	19
依诺沙星	321.1	303.0*	23
		234.0	31
环丙沙星	332.1	314.1*	22
		231.1	38
培氟沙星	334.1	290.1*	20
		316.1	18
洛美沙星	352.1	265.1*	22
		308.1	16
达氟沙星	358.2	340.2*	25
		96.0	23
恩诺沙星	360.2	316.1*	26
		245.0	20
氧氟沙星	362.1	318.1*	26
		261.1	20
麻保沙星	363.1	320.0*	21
		72.0	15
沙拉沙星	386.2	342.1*	20
		299.1	27
二氟沙星	400.2	356.1*	30
		299.0	19

色谱图或者加标回收率结果

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图1.基质混合对照溶液50μg/L图谱

图2.基质混合对照溶液50μg/L各目标物图谱

图3.鸡肉样品空白图谱

图4.鸡肉样品加标50μg/kg图谱

表3 加标回收率表（加标水平为50μg/kg）

峰号	物质	平均回收率	RSD值
1	四环素	92.77%	1.91%
2	金霉素	94.73%	2.45%
3	土霉素	85.55%	0.46%
4	多西环素	107.57%	3.44%
5	乙酰磺胺	85.49%	5.28%
6	磺胺吡啶	106.64%	3.43%
7	磺胺嘧啶	106.54%	2.15%
8	磺胺甲恶唑	106.53%	3.23%
9	磺胺噻唑	93.71%	3.09%
10	磺胺甲嘧啶	107.09%	0.85%
11	磺胺二甲异恶唑	94.63%	4.16%
12	磺胺甲塞二唑	99.42%	5.48%
13	苯甲酰磺胺	89.26%	3.76%
14	磺胺二甲异嘧啶	104.68%	1.92%
15	磺胺二甲嘧啶	118.44%	3.30%
16	磺胺间甲氧嘧啶	107.28%	1.06%
17	磺胺甲氧哒嗪	103.04%	8.86%
18	磺胺对甲氧嘧啶	103.04%	8.86%
19	磺胺氯哒嗪	99.75%	3.86%
20	磺胺邻二甲氧嘧啶	112.81%	8.42%
21	磺胺间二甲氧嘧啶	99.37%	5.06%
22	磺胺苯吡唑	87.87%	1.33%
23	酞磺胺噻唑	89.24%	7.81%
24	噁喹酸	93.13%	3.23%
25	氟甲喹	95.38%	0.28%
26	诺氟沙星	96.89%	3.21%
27	依诺沙星	100.73%	4.71%
28	环丙沙星	106.40%	3.01%
29	培氟沙星	102.84%	1.50%
30	洛美沙星	89.89%	1.05%
31	达氟沙星	100.00%	5.48%
32	恩诺沙星	92.86%	0.35%
33	氧氟沙星	104.02%	0.28%
34	麻保沙星	105.96%	0.48%
35	沙拉沙星	103.00%	4.25%
36	二氟沙星	95.80%	0.47%

相关产品信息

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货号	名称	规格
00522-20009	SPE小柱	Welchrom^® BRP， 60mg/3mL，50pk
00837-05006	50mL螺口尖底离心管	Welchrom^®一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL，50/包
00837-05002	15mL螺口尖底离心管	Welchrom^®一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，15mL，50/包
00821-32291	盖子+垫片	Welchrom^®预切口红色特氟龙/ 白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk
00821-40927	样品瓶	Welchrom^®2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk
00201-11010	色谱柱	Ultimate^® UHPLC XB-C18， 1.8μm，2.1×50mm
U808-201-25	保护柱柱芯	Ultimate^® UHPLC XB-C18，超高压柱芯：2.1×5mm
00802-02201	针头式过滤器	进口NY，13mm*0.22μm，100pk