进出口水产品中亚甲基蓝残留量检测方法

2022-11-16 17:53:48 月旭科技（上海）股份有限公司

一、适用范围

本标准规定了水产品中亚甲基蓝残留量测定的高效液相色谱检测方法。

本标准适用于鱼、虾及其制品中亚甲基蓝残留的测定和确证。（本实验样品为龙利鱼）

参考标准：《SN 1974-2007 进出口水产品中亚甲基蓝残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法和高效液相色谱法》

二、提取步骤

样品前处理：将样品经搅拌机搅碎，冷藏保存，备用。

准确称取5g鱼肉试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入5g中性氧化铝，再依次加入1mL对甲苯磺酸溶液、4mL乙酸钠缓冲溶液，涡旋1min。加入8mL乙腈，10000r/min均质2min，4000r/min离心5min，将上清液转移到另一个50mL离心管中，再加入4mL乙腈重复提取残渣一次，合并上清液。然后在上清液中加入8mL二甘醇溶液，10mL二氯甲烷，涡旋1min，4000r/min离心5min，收集下层有机层于浓缩瓶中，在40℃下减压旋转蒸发至近干，加入6mL乙腈溶解残渣，待净化。

三、净化步骤

SPE柱：月旭Welchrom® Alumina-N小柱，规格：500mg/3mL。

活化：3mL乙腈，弃去；

上样：待净化液全部上样，收集；

淋洗：2mL乙腈，收集；

洗脱：4mL甲醇，收集；

浓缩：40℃氮吹至近干后用10%甲醇溶液定容至1mL，过0.22μm微孔滤膜，供上机检测。

四、色谱条件

高效液相色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm，5μm；

洗脱程序：梯度洗脱，0min时，甲醇与0.1%甲酸水体积比为10:90；7min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；9min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为95:5；12min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90；15min时，甲醇与0.1%甲酸体积比为10:90；

流速：0.5mL/min；

柱温：30℃；

进样量：50μL；

检测波长：655nm。

五、色谱图或者加标回收率结果

图1. 亚甲基蓝空白加标0.025μg/mL图谱

表1、出峰情况

峰名称	保留时间	峰面积	峰高	相对峰面积	拖尾因子	分离度	塔板数
	min	mAU*min	mAU	%		(EP)	(USP)
亚甲基蓝	8.672	0.1039	1.40	100.00	1.74	n.a.	108040

图2. 鱼肉样品空白图谱

图3. 鱼肉样品加标0.005mg/kg图谱

表2、加标回收率表

物质	加标水平	平均回收率	RSD值（n=2）
亚甲基蓝	0.005mg/kg	103.08%	1.78%

六、相关产品信息

货号	名称	规格
00518-20005	SPE小柱	Welchrom® Alumina-N,500mg/3mL, 50pk
00837-05006	50mL螺口尖底离心管	Welchrom® 离心管一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包
00824-31001	固相萃取装置	Welch 固相萃取装置，12位方缸
00821-32291	盖子+垫片	Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk
00821-40927	样品瓶	Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk
00201-31041	液相分析柱	Ultimate® XB-C18，4.6×150mm， 5μm
00802-02201	针头式过滤器	Welchrom® 进口NY,13mm*0.22μm,100pk