酵母杂交Tips8 蛋白互作组检测技术比较

在生命系统中，包括蛋白质在内的生物分子很少独立工作，在完成生命活动的调控过程中，分子间的相互作用或是擦肩而过，或是牢牢结合形成复合体，其中蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）构成了无数的生物途径和活动机制的基础，阐明蛋白质如何相互作用有助于对生命机制的系统理解。今天小编来带大家总结一下2种主要的蛋白互作组研究方法。

酵母双杂交技术

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技术流程

• 构建相应材料的酵母文库；

• 构建诱饵载体；

• 诱饵自激活检测；

• 筛选文库中与诱饵互作的蛋白质；

• 阳性克隆测序和分析；

• 一对一验证。

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技术优势

• 活细胞内检测一对一的互作蛋白组，反应生理状态下的互作实景；

• 互作检测结果直观，肉眼可辨；

• 结果真实，可以甘油菌形式进行互作实物保存，重复性好；

• 物种普适性高；

• 高通量筛选蛋白互作网络，一对一验证提高数据可信度；

• 无需蛋白提取，不会因为提取动作，影响互作真实性。

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技术缺点

• 实验流程多，周期较长；

• 无菌操作要求高；

• 蛋白质翻译后修饰水平与高等动植物可能存在差异。

亲和纯化质谱

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技术流程

• 构建融合标签的诱饵蛋白表达载体；

• 载体瞬时转染靶细胞或组织；

• 准备细胞抽提物，可通过WB检测表达效果；

• TAP纯化互作蛋白，可设置实验组和对照组分别酶解后，获得2组多肽混合物；

• 质谱鉴定互作蛋白。

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技术优势

• 可以鉴定出在空间上非直接物理相互作用的蛋白质（也可解读为劣势）；

• 得到接近生理条件下与标记蛋白相互作用的蛋白质；

• 可实现大规模自动化研究蛋白互作网络。

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技术缺点

• 准备细胞抽提物时需保持蛋白相互作用的稳定性，处理方式不能太剧烈，因此不太适用于膜蛋白或核蛋白的互作蛋白检测；
• 无法确定所鉴定到的蛋白是否是与诱饵蛋白直接互作的（也可解读为优势）；
• 串联亲和纯化严格程度不同，可能会导致假阳性或假阴性。