No.30｜BP 2015｜复合维生素注射液的定量分析（1）——维生素B1、维生素B6及烟酰胺

复合维生素注射液

复合维生素注射液用于营养不良及因缺乏维生素B类所引起疾患的辅助治疗，如厌食、脚气病、糙皮病等。

维生素B1又称硫胺素，是碳水化合物代谢所需辅酶的重要组成成分。

维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢。

烟酰胺为辅酶Ⅰ及Ⅱ的组分，为脂质代谢、组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。

右泛醇（D-泛醇）又称原维生素B5，进入人体内能转化为泛酸，进而合成辅酶A，促进人体蛋白质、脂肪、糖类的代谢，保护皮肤和粘膜，改善毛发光泽，防止疾病的发生。

（以上列出组分为配方中部分成分，本次推送介绍前三种化合物的分析，下期将介绍右泛醇的分析数据）

客户之前使用BP 2015英国药典方法中推荐的μ-Bondapak的色谱柱进行分析，但据说该款色谱柱已停产，因此需寻找合适的替代色谱柱。

客户提供了复合维生素注射液样品及维生素B1、维生素B6和烟酰胺对照品溶液，并反馈在现有条件下使用C18柱进行定量分析时，烟酰胺出现杂质干扰，无法准确定量。

客户希望本实验室参考BP 2015英国药典方法，筛选合适的色谱柱对复合维生素注射液中的维生素B1、维生素B6和烟酰胺进行定量分析。

维生素B1

Thiamine chloride

M.W. : 300.81

维生素B6

Pyridoxine

M.W. : 169.18

烟酰胺

Nicotinamide

M.W. : 122.12

依据BP 2015方法，流动相中添加了二乙胺和庚烷磺酸钠。本实验室分别尝试了中等极性的CAPCELL PAK C18 MGII、高极性的CAPCELL PAK C18 AQ、高碳载量的SUPERIOREX ODS以及低极性的CAPCELL PAK C18 UG120色谱柱分别对注射液样品进行分析。

如图1，对几款柱子分析所得结果对比后发现，能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ所得分离效果最佳，其中，烟酰胺与前后杂质分离度在0.9以上，满足BP方法中不低于0.8的分离度要求。

▲图1 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果

色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5 ; 4.6mm i.d.×250mm （A6AD 03113）

流动相：溶液A*：甲醇：乙腈= 800:100:100

流 速：1.2 mL / min

柱 温：30°C

进样量：20 μL

样 品：注射液用0.45 μm滤膜过滤

检 测：PDA 280 nm

注：①峰上所标数字为分离度 ②溶液A * 15ml冰醋酸，2.5mL二乙胺和1.1g庚烷磺酸钠溶解至1000mL水中。

就该结果与客户沟通，客户希望对液相条件进行适当调整，在满足英国药典要求的基础上，进一步实现烟酰胺与其前后杂质之间的基线分离。

首先，我们考察柱温对分离的影响——分别在30°C、35°C、40°C柱温条件下考察分离效果，发现仍在原条件，即30°C条件下分离效果最佳；进一步，尝试调整流动相中有机相的比例，将原条件中各10%的甲醇和乙腈均降低至6%，如图2，烟酰胺与其先后杂质峰之间分离度均在1.70以上，能够得到基线分离的良好结果。

▲图2 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果（调整条件）

▲图3 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱分析所得结果（调整条件）局部放大图

色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5 ; 4.6mm i.d.×250mm （A6AD 03113）

流动相：溶液A*：甲醇：乙腈= 880:60:60

流 速：1.2 mL / min

柱 温：30°C

进样量：20 μL

样 品：注射液用0.45 μm滤膜过滤

检 测：PDA 280 nm

注：注：①峰上所标数字为分离度 ②溶液A * 15ml冰醋酸，2.5mL二乙胺和1.1g庚烷磺酸钠溶解至1000mL水中。

综上实验结果，使用能在纯水相条件下稳定使用的高极性色谱柱CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm，依据BP 2015英国药典方法，通过调整流动相中有机相比例，能够实现复合维生素注射液中维生素B1、维生素B6和烟酰胺的良好分离及准确定量分析。