2022-09-20 10:40:05, 肖叶宁 上海吉凯基因医学科技股份有限公司
肝细胞癌是一种较常见的恶性肿瘤类型,其发病率及死亡率较高,而且早期诊断困难,治疗后生存率仍不理想。CCNB2是细胞周期蛋白家族的重要成员之一,是细胞周期进程的正调控分子,能促进多种恶性肿瘤肿瘤发生发展,但在肝癌中生物学功能尚不清楚。本课题组前期研究发现CCNB2和肝癌的发生发展紧密相关,具备成为新型诊断生物标志物和临床治疗靶点的前景,其具体机制仍需进一步解析。
2022年3月29日,中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授团队在《Aging-US》上发表题为“Cyclin B2 overexpression promotes tumour growth by regulating jagged 1 in hepatocellular carcinoma”的研究论文,该研究揭示了CCNB2或许经由对JAG1的靶向调节在肝癌发生发展中发挥作用,为进一步研究肝癌发病机理指出了新的思路。CCNB2可能与肝细胞癌的发生发展进程有关,有作为新的治疗靶点的潜力。本研究中用于敲低CCNB2的慢病毒产品及用于发现CCNB2下游基因的蛋白质组学、IPA分析均由吉凯基因提供产品或技术服务。
研究思路概述
通过转染慢病毒构建CCNB2敲低的肝癌细胞模型,使用裸鼠荷瘤模型检验CCNB2对肝癌的影响。通过TMT蛋白质组学检测CCNB2下游靶基因,并通过差异蛋白分析、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析最终筛选出JAG1。基于此,进一步解析CCNB2通过调控JAG1促进肝癌进展的机制。
研究结果
1. 构建CCNB2低表达的肝癌细胞系
通过转染慢病毒构建CCNB2低表达的肝癌细胞模型,采用实时荧光定量 PCR评估CCNB2的敲低效率。CCNB2-RNAi慢病毒(由吉凯基因提供)感染后慢病毒感染后的KD组Huh-7细胞中CCNB2基因表达水平明显下调。
2. CCNB2促进裸鼠肿瘤生长
向随机分组的20只裸鼠分别皮下注射敲低CCNB2的肝癌细胞系Huh-7和未敲低的肝癌细胞系Huh-7,并观察裸鼠成瘤情况。裸鼠成瘤实验结果提示,敲低CCNB2降低裸鼠成瘤率、减小瘤体体积和重量、敲低CCNB2抑制瘤体增殖。总体结果提示,CCNB2可能具有促进肝癌增殖,影响肝癌产生和进展的作用。
3. 蛋白质组学寻找受CCNB2调控的下游基因
进一步,使用敲低CCNB2(KD组,n=3)和未敲低CCNB2(NC组,n=3)的肝癌细胞系Huh-7进行TMT蛋白质组学检测(由吉凯基因提供)以筛选受CCNB2调控的下游基因。蛋白质组学共检测到7271个蛋白,其中130个蛋白存在表达差异(fc>1.2,p<0.05),包含78个上调蛋白和52个下调蛋白。我们从筛选出的差异蛋白质中挑选30个蛋白进行PRM靶向蛋白质组学验证及IPA分析(均由吉凯基因提供)。结果提示,一个蛋白JAG1在敲低组中下调,且IPA分析显示JAG1与肝细胞癌增殖和凋亡相关。因此,JAG1作为CCNB2的潜在下游靶点用于后续研究。
4.下调CCNB2可抑制JAG1的表达
我们检测了裸鼠瘤体中CCNB2与JAG1的表达相关性,结果表明敲低CCNB2可以使JAG1表达下调,CCNB2与JAG1的表达存在明显的功能相关性。
5. CCNB2通过调控JAG1促进肿瘤细胞增殖和迁移
我们继续在CCNB2敲低或对照的Huh-7细胞中过表达JAG1,并检测肝癌细胞增殖能力的改变。结果显示,敲低CCNB2 降低肝癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力,而过表达JAG1部分回复了CCNB2敲低引起的增殖、迁移和侵袭能力减弱的作用。这一结果印证了CCNB2与JAG1存在明显的功能相关性,JAG1可能作为CCNB2的下游靶点发挥促进肝细胞癌发生发展的作用。
6. JAG1在肝细胞癌组织中表达上调
本研究收集了82例肝癌石蜡包埋样本和相对应的20例癌旁石蜡包埋样本。免疫组化检测证实了JAG1在肝细胞癌组织中高表达,并且JAG1表达与肿瘤大小、肿瘤数目、癌栓形成显著有关。
研究总结
我们的研究验证了敲低CCNB2在肝癌裸鼠成瘤中的作用,发现敲低CCNB2基因可抑制裸鼠成瘤。CCNB2可能具有促进肝癌增殖作用。通过蛋白质组学、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析筛选出CCNB2的下游靶标JAG1。细胞功能回复实验验证了CCNB2可能通过调控JAG1在HCC发生发展中发挥功能。总体,本研究发现了CCNB2的促癌作用,且揭示了一种新的CCNB2下游作用机制。CCNB2在未来可能有机会作为肝癌的候选生物标志物。
吉凯助力
本研究中用于敲低CCNB2的慢病毒产品及用于发现CCNB2下游基因的蛋白质组学、IPA分析均由吉凯基因提供产品或技术服务。
作者简介
中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授为本研究通讯作者,中南大学湘雅医学院附属海口医院硕士研究生肖叶宁为本研究第一作者。
左:黄晓曦教授 右:肖叶宁硕士
吉凯基因凭借多年在靶标筛选及验证服务领域的技术积累,建立的标准化 、工程化 、系统化的GRP平台,为中国研究型医生提供科研服务,加快科研成果转化。其中,多组学平台包含蛋白质组学平台和高通量测序平台:
·蛋白质组学平台拥有多台timsTOF Pro、Exploris 480高精度质谱仪,专业领先的Spectronaut Plusar、Mascot等分析软件,提供专业的4D、DIA、TMT、PRM、磷酸化修饰组、olink蛋白质组等检测服务,强大的机器学习算法、IPA分析、蛋白基因组分析服务,系统的生物标志物、分子分型、药物靶点、基因功能研究等解决方案,真正让广大研究型医生的科研工作更省心、更省力、更高效;
·高通量测序平台分为常规测序服务和单细胞测序服务:单细胞测序拥有10x和BD两个平台,提供单细胞RNA-seq、单细胞核测序、单细胞混样RNA-seq、单细胞TCR/BCR、单细胞(RNA+ATAC)、空间转录组测序等服务;常规测序服务提供meRIP-seq(m6A/m1A/m7G/m5C 等RNA甲基化修饰测序)、acRIP-seq(ac4C RNA乙酰化修饰测序)、ATAC-seq、Ribo-seq(翻译组测序) 、mRNA/miRNA/LncRNA/circRNA-seq、全转录组测序(两文库/三文库)、外泌体miRNA/LncRNA-seq、WGS/WES、WGBS、RRBS、BSAS等服务。
近期讲座预告
2022.9.27下午14:00 /
国自然季第二讲——玩转单细胞测序:数据挖掘+多组学联用,打开新思路
直播课时间:2022年9月27日14:00
14:00-14:45不用敲代码,也能做单细胞转录组生信分析啦郝慧渊生信售前顾问课程内容:1.单细胞数据可视化工具-cellxgene操作宝典2.机制挖掘神器-IPA的原理及应用
14:45-15:30单细胞测序+空间转录组探索肿瘤异质性童丹丹博士NGS线科研顾问课程内容:1.单细胞测序&空间转录组的基本原理2.单细胞测序+空间转录组联合分析的必要性3.单细胞测序结合空间转录组在肿瘤研究中的应用
扫码回复“单细胞”报名
1.实验技术干货
2.蛋白质组学研究
3.腺病毒简介及应用
4.临床基础研究思路解析
5.组织特异性腺相关病毒
6.单细胞测序
7.慢病毒实验操作指南
8.悬浮细胞专用病毒
9.靶点设计/数据库教程
10.测序技术研究与应用
11.非编码RNA研究技术与应用
12.腺相关病毒选择/应用
13.表观遗传研究
14.文章解析
15.国自然课题设计思路解析
16.生物信息分析及工具
17.外泌体研究
18.肿瘤免疫研究
19.高分文章
20.吉凯病毒神经方向应用案例
07-01 英斯特朗
连载 | 药物一致性评价与粒度分析(三)07-01 欧美克仪器
【仪器百科】LS-909丨干湿二合一激光粒度分析仪07-01 欧美克仪器
标准物质解决方案 | PFASs(全氟及多氟化合物)06-29
第九期阿尔塔有约 | 环境专题【新污染物:PFAS】技术研讨会精彩回顾及提问解答06-29
“绿色技术范式”,分析化学未来发展方向——访中国分析测试协会副理事长、辽宁省分析科学研究院原院长刘成雁教授06-29 转载仪器信息网
华西医院-标准型数显脑立体定位仪、双通道体温维持仪、体式显微镜安装完成06-29 迈越生物
科鉴检测助力2家仪器企业获得首批产品可靠性认证证书06-28 科鉴检测
德国耶拿:锂电池生命周期分析解决方案06-28 德国耶拿
AI已来!生命科学本科教学如何紧跟技术浪潮06-28 Opentrons
盛瀚售后,五星级服务的秘诀是什么?06-28 SHINE
专为汽车制造商打造的柔性解决方案——实现制程控制06-28
西北工业大学-脑立体定位仪安装完成06-28 迈越生物
会议邀请 | 第九届海上检验医师论坛06-28
卓立要闻 | 创新发展ing…6月卓立“大事小情”速览06-28 光电行业都会关注
打造信任合作伙伴!2024年度卓立汉光客户满意度调查开启06-28 光电行业都会关注
如何挑选适用于三阶光学非线性的测量系统?Z扫描测量系统来助力!06-28 光电行业都会关注
招聘启事—中国科学院沈阳自动化研究所微纳光学测量表征技术课题组06-28 光电行业都会关注
谱育科技作为主要完成方 荣获2023年度国家科学技术进步一等奖和二等奖06-28 点击关注→
仪器原理丨顶空仪与吹扫捕集仪科普小知识06-28 天美色谱