2022-08-11 18:01:09, YoYo老师 三耀精细化工品销售(北京)有限公司
这次,YoYo就来帮您看看裂峰的问题——在液相分析中,裂峰问题也时有出现,主要由以下两方面因素带来:
1. 色谱柱方面问题:
→填料塌陷或损坏(外力导致)
→填料表面被污染、吸附
→发生盐析
→色谱柱入口端筛板堵塞
2. 液相方法方面问题:
→流动相pH选择不合适
→溶剂效应(特别是离子对试剂方法)
接下来将对不同场合下的裂峰原因及对策进行说明。
色谱柱方面问题
问题来源① 填料发生坍塌或损坏
问题来源② 填料表面发生吸附、污染
▲被中药基质污染的色谱柱,出现裂峰
▲正常色谱柱填料
▲复杂基质吸附导致填料污染变色
问题来源③ 有缓冲盐结晶析出
高盐体系中色谱柱的使用注意事项
★ 色谱柱保存液
大阪曹達新色谱柱的出厂保存液多为纯乙腈(可查看柱盒中附带的柱效报告单进行确认),为避免盐析,请先使用与流动相比例相同、但不含盐的溶液对色谱柱进行冲洗置换。切勿使用纯水冲洗色谱柱。
★ 流动相的置换
在置换不同种类的流动相时,请务必充分考虑不同种类盐的溶解情况。
★ 梯度条件
在梯度条件的有机相比例最高点,所用缓冲盐是否能够充分溶解。
★ 色谱柱的保存
在昼夜温差较大时,建议夜间持续小流速通液,以防止盐析;
实验完毕后,使用不含盐的流动相对色谱柱和仪器进行冲洗置换。
问题来源④ 色谱柱入口端筛板堵塞
液相方法方面问题
问题来源① 流动相pH选择不合适
▲由于流动相pH设置不当导致的裂峰现象
问题来源② 溶剂效应(特别是离子对试剂方法)
- 示例 -
对以上5种维生素类化合物进行分析,流动相中添加离子对试剂己烷磺酸钠。可以发现,当样品溶剂为10% CH3CN溶液时, 随着进样量的增大,吡哆醇及硫胺均出现裂峰;而当样品溶剂为含离子对试剂的流动相时,不再出现裂峰。
样品溶解 : CH3CN / H2O = 10 / 90
样品溶解 : 流动相(含离子对试剂)
综上,在使用离子对试剂的分析中,样品溶剂和进样量均会对结果产生很大影响,在进行方法开发时需注意。
梯度洗脱时,部分峰形变差
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