液相分析常见问题⑤ 峰形变差怎么办？Part 3 - 裂峰

众所周知，色谱柱如果遭遇磕碰、剧烈震动等粗暴的对待，可能会导致其内部填料柱床的断裂、坍塌、分布不均等情况，从而导致色谱峰形整体变差，所有色谱峰均出现肩缝、裂峰等现象。

   → 这种损坏很难恢复，建议更换新的色谱柱。

▲被中药基质污染的色谱柱，出现裂峰

▲正常色谱柱填料

▲复杂基质吸附导致填料污染变色

①常规反相柱冲洗：20%乙腈溶液小流速冲洗过夜，再使用80%乙腈溶液冲洗2小时；

   →冲洗后重新测定柱效，判断色谱柱是否可以继续使用。

②充分的样品前处理+预柱

   →可有效延长色谱柱寿命。

盐析是色谱柱使用过程中的常见问题。

盐析会导致色谱峰裂峰或其他的峰形变差，同时，盐析的一大典型特征是柱压明显上升。

如上左图，对色谱柱进行柱效测定，发现所有色谱峰均出现裂峰现象；

   →打开柱头，发现填料表面出现明显盐结晶析出；

   →遂对其进行高水相小流速过夜冲洗，同时观察压力变化；

   →再次测定柱效，如右图，峰形和理论塔板数均得到很大改善，柱效恢复正常。

★ 色谱柱保存液

大阪曹達新色谱柱的出厂保存液多为纯乙腈（可查看柱盒中附带的柱效报告单进行确认），为避免盐析，请先使用与流动相比例相同、但不含盐的溶液对色谱柱进行冲洗置换。切勿使用纯水冲洗色谱柱。

★ 流动相的置换

在置换不同种类的流动相时，请务必充分考虑不同种类盐的溶解情况。

★ 梯度条件

在梯度条件的有机相比例最高点，所用缓冲盐是否能够充分溶解。

★ 色谱柱的保存

在昼夜温差较大时，建议夜间持续小流速通液，以防止盐析；

实验完毕后，使用不含盐的流动相对色谱柱和仪器进行冲洗置换。

色谱柱筛板堵塞有时也会造成色谱峰的裂峰。

   →加强对样品的前处理，高速离心并过0.22 μm滤膜，能够有效去除一些大体积杂质。

由于离子型化合物自身存在解离平衡，因此当流动相的pH值选择不当时，可能会处于在离子态和分子态形态共存的情况，这时会导致裂峰或其他峰形问题。

   →建议流动相pH设定为分析对象pKa±2以上范围

样品溶剂和流动相差别较大的时候可能发生裂峰现象，特别是流动相中含有离子对试剂的情况。

在离子对条件分析时，裂峰可能由以下原因引起：

● 平衡不充分

   → 充分平衡色谱柱及系统 

● 溶剂效应

   → 用含离子对试剂的流动相溶解样品

● 样品过载 

   → 降低进样量

● 离子对试剂添加量不足

   → 使用量控制在 5～10 mmol/L

● 含有两种或两种以上离子对试剂

   → 同时使用多种离子对试剂可能会导致结果重现性差，建议使用一种离子对试剂

至此，大曹色谱关于液相分析中色谱峰形变差的3期推送分别介绍了色谱峰形前延、拖尾及裂峰的原因及对策，你都学会了吗？

接下来，YoYo还想对最后一种由于溶剂效应带来的峰形变差情况——梯度洗脱时的独特溶剂效应。

在梯度洗脱中，若出现部分色谱峰峰形变差的现象，可能是由样品溶剂和流动相之间溶解性的不同造成的。

在梯度分析中，如果像上述示例，使用高溶解能力的甲醇对多组分样品进行溶解并大量进样，在梯度洗脱初期（高水相）保留较弱的样品由于受到溶剂甲醇的影响，色谱峰会发生前延；而保留较强的样品，一旦在高水相下析出，需要花费时间重新溶解到流动相中，因此色谱峰会出现拖尾的现象。

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