应用分享︱采用TSKgel G2000SWXL色谱柱测定促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度

促胰岛素分泌肽（Exendin-4）是一种来源于美洲希拉毒蜥唾液中的含39个氨基酸的多肽，其作用机制与GLP-1类似，能够促进胰岛素的分泌、增加胰岛素敏感性、改善胰岛细胞功能。

促胰岛素分泌肽融合蛋白（Exendin-4-Fc fusion protein, 简称E4F4）是将Exendin-4与人IgG的Fc片段相连重新构建的结构蛋白，可在不影响药效的同时延长了药物的体内半衰期，有效改善Exendin-4 在机体内的药物代谢动力学特性。

本次分享的应用，作者采用了TSKgel G2000SWXL凝胶色谱柱建立了测定E4F4药物纯度的方法，经验证该方法适合E4F4纯度检测。

色谱柱: G2000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5 μm)

流动相: 20 mMPBS（pH 6.8)

图1  系统适用性色谱图

图2  专属性实验色谱图

采用TSKgel G2000SWXL色谱柱建立了促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度测定方法，分离谱图见图1，空白溶剂在积分范围内无吸收峰出现，E4F4主峰的理论塔板数为4238 (>3000) ，对称因子为1.44 (>1.3)。

采用相对分子质量为60000的ATIII和相对分子质量为21000的 rh-CNTF为阴性对照，采集E4F4样品以及E4F4、ATIII、rh-CNTF混合样品的色谱图 (见图2) ，经计算，ATIII与E4F4分离度为 0.89，rh-CNTF与E4F4分离度均为4.32，3种样品分离度良好。

精密度测试结果，目标峰面积RSD为0.49% (n=6)，保留时间RSD为0.11% (n=6)，纯度RSD为0.01% (n=6)。以上结果说明该方法适合E4F4纯度检测。