实验E招鲜丨轻松重返实验室的四个步骤
2022-06-10 19:17:40, OLYMPUS生命科学
仪景通光学科技（上海）有限公司
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疫情的阴霾逐渐消散，大家将陆续重返实验室，重启暂停许久的研究工作。
但实验室关闭或突发紧急情况造成的设备停用、设备维护缺失、再次开启时的调试等等问题摆在面前，重返实验室时大家都不免有些紧张。如何重整旗鼓，将实验设备恢复到应有的状态？为了帮您轻松重返实验室，我们有着多年实战经验的工程师，为您准备了重返实验室的四步指南。![]()
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这个问题看上去似乎并不重要，但实际情况是，以错误的方式为设备接通电源可能会对系统性能造成不良影响。以下为需要遵循的一些通用方法：
• 首先启动PC计算机：计算机是显微镜系统的“大脑”，所以记住要首先启动和登录PC计算机。 • 打开系统所有硬件：根据系统情况不同，可能需要特别注意打开硬件的顺序。比如：在打开触控屏TPC之前，必须先接通奥林巴斯系统控制器CBH电源。有关具体说明，请参阅您的手册。 • 启动软件：如果您在软件启动过程中遇到错误，我们将为您提供帮助！相关技术协助请与您当地的销售代表联系。
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设备接通电源后，需要花一些时间适当准备、放置和调平样品才能进行成像。操作提示如下：
• 准备样品
首先，选择适当的盖玻片。盖玻片大多为国标 0.17毫米厚（170微米）。配合盖玻片使用的奥林巴斯物镜，需要合适的厚度才能获得良好的图像质量。如果盖玻片太厚或太薄，就可能影响清晰度。
务必检查盖玻片的厚度，尽量使用标准载玻片。某些应用可以使用塑料载玻片。但对于荧光成像而言，塑料具有自发荧光特性。它会在蓝色和绿色通道（有时在红色通道）中产生明显的背景光。
另外，在成像之前清洁盖玻片和载玻片也非常重要。比较好用的清洁溶液为无水乙醇。另外也可以选择光学清洁剂，比如OLYMPUS HYPER CLEAN 6310 Optical Lens Cleaner。
在清洁光学器件时，必须要使用擦镜纸或脱脂棉。如果使用普通面巾纸或实验室纸巾，会有严重掉屑影响成像。
接下来，以正确的朝向在显微镜上放置准备好的样品。原则上盖玻片朝向物镜，如正置显微镜盖玻片要朝上放置，倒置显微镜则盖玻片朝下放置。
倒置显微镜需要将切片颠倒放置，常见的错误是在放置切片时将盖玻片朝上放置，这样会导致图像模糊。
使用倒置显微镜时，一定要检查样品是否密封良好。如果样品密封性不佳，那么液体可能会接触到您的物镜或物镜转换器。这类液体可能会腐蚀或氧化光学涂层、光学胶或显微镜硬件和电子器件。
放置样品时，请注意物镜的工作距离。简单说，工作距离就是物镜在聚焦时需要靠近标本的距离。一般情况我们需使用低倍物镜找寻焦点，比如10X及以下物镜。很多时候研究人员一般不需要担心样品的平整度问题。载物台既是固定的又是平整的，样品托架是平整的，载玻片也是平整的。但是对于共聚焦显微镜、TIRF或图像拼接等更为敏感的应用而言，样品的平整度至关重要。当样品发生倾斜时，就可能会产生虚焦。例如进行图像拼接操作时，会产生明显拼痕。解决方法是通过某些载物台插入配件上的校平螺钉来改善样品的平整度。校平螺钉通常位于载物台样品适配器的四周。左图：使用经过良好对准的奥林巴斯FV3000激光扫描共聚焦显微镜和平坦样品采集的图像。
右图：使用经过良好对准的FV3000激光扫描共聚焦显微镜和不平坦样品所采集的图像。阴影的来源有些时候很难确定。通常情况下，样品在样品托架内不平整就可能会造成阴影。（使用20X UPlanXApo物镜采集的图像。洋红色为Hoechst，绿色为MAP2（MCA-5H11）经Alexa 488染色）。
• 确定您的浸没介质
奥林巴斯物镜常见的介质类型：空气、水、无荧光镜油和硅油。
如果物镜所使用的浸没介质选择错误，图像质量就会受到影响。此外，如果浸油进入到并非为油浸设计的物镜内，就可能会造成设备损坏。
由于这些方面的原因，了解为您的物镜设计的浸没介质非常关键。我们的物镜上的颜色标记可以让您轻松识别相应的浸没介质，确保您选择正确。
另外，还需要考虑您的工作流程。不要在使用60X硅油物镜成像之后，立即切换到60X水浸物镜，硅油和水的混合不会获得清晰的图像。此外，在水浸之前，需要将载玻片取出并进行清洁。
最后，务必要使用物镜制造商为您提供的专用镜油。
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奥林巴斯有很多物镜使用镜油，确保使用正确的镜油对于成像成功至关重要。
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标本准备好，就可以进行图像采集步骤了。以下为一些图像采集的技巧：
通过共聚焦或宽视场荧光显微镜采集图像时，通常要合理的匹配照明亮度和曝光时间，这样可以减少光漂白和光毒性。如照明亮度过低，采用较高的检测灵敏度会导致噪音；如照明亮度过高，即会产生光漂白和光毒性。所以，要平衡照明亮度和检测器灵敏度参数，不同的标本要适当调整。可以尝试先使用较低的照度和较高的检测灵敏度。这样可以减少光漂白和光毒性。我们的某些物镜配有校正环。在没有经过培训的情况下，这些功能可能会令人困惑。一般性指导原则包括：1. 无盖玻片时，请使用0.0；而对于常见的0.17mm的盖玻片，则请将矫正环转到0.17的位置。2. 检查校正环上是否标有温度提示。如标有温度提示，则还要考虑室温与所标温度是否匹配。请根据温度设置校正环。在室温的情况下，请将矫正环上白色数值对准标记线，在37°C的情况下，请将黄色的数值对准标记线。开始成像时，在保持聚焦图像亮度的同时优化校正环。这一步需要耐心，并且要多加练习。如果无法优化，则第一步时应根据是否有盖玻片将校正环转到标记0.0或0.17。![]()
60X UplanXApo物镜（右）使用标准浸油，且没有校正环。60X UplanApo油浸物镜（左）使用设为0.17（＃1.5盖玻片）的校正环。60X UPlanSApo（中间）使用硅油浸没，并在37°C时将校正环设为0.17（＃1.5）。 • 聚光镜对准
如果您的主要应用是荧光观察，那么常规显微镜操作时，可能不会使用聚光镜。在这种情况下，可使用聚光镜手柄将聚光镜移离样品。如果想要进行明场、相衬或DIC成像，那么通常第一步要校准聚光镜的位置。在明场模式下，对样品聚焦，然后关闭视场光圈以便可以看到视场光栏的像。这一过程在10X或20X倍率下最容易完成。如果视场光栏的像并不清晰或没有居中，可通过进行科勒照明让聚光镜高度和中心处对齐。![]()
聚光镜对准程序：（a）关闭视场光圈，（b）将视场光栏的像中心居中，（c）确认精确中心，让视场光栏的像内切到视场边缘，（d）然后让视场光栏的像外切。
• 文件大小
显微镜文件可能会很大。但文件的大小可以通过某些方式缩减。比如无效数据，如果用“以防万一”对所有位置进行成像的办法，实际上会让问题变得更复杂。利用您所需要的视场、分辨率和位深，对所需要的部位进行成像。会减少数据存储和数据处理带来的不必要的负担。 • 保存文件
要尽可能地马上保存文件。计算机和硬盘在任何时候都有可能出现问题，因此要将图像保存到多个位置。使用U盘或外部硬盘驱动器时务必当心。这类设备容易造成病毒感染，让病毒或恶意软件在计算机之间传播。成像系统PC计算机为了避免影响性能，很多PC没有安装防病毒软件。这样就造成计算机更容易感染病毒。成像系统PC出现病毒感染可能并不会立即体现，但系统运行速度可能会变得缓慢，或者偶尔发生崩溃。为了避免这类风险，请在外部存储驱动器连接到成像系统PC计算机之前，先对其进行病毒扫描。奥林巴斯使用诸如OIR、OIF、VSI和OIB等专有文件格式。这些格式可以：在安装适当插件的情况下，ImageJ可以打开这类奥林巴斯文件。我们建议尽可能以奥林巴斯文件格式保存图像，但有时也需要将文件导出为TIFF、JPEG 2000或其他格式。注意：导出文件选项或导出图像文件类型，均会造成图像压缩或分辨率降低。请避免使用JPEG图像，是因为这种格式往往会导致图像被压缩，并且细节数据会丢失。
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正确关闭系统与正确启动系统同样重要。以下为一些有效做法：
成像完成后，清理、清洁系统不仅是基本要求，还可以防止硬件损坏。比如，油浸物镜使用的标准浸油，如果留在物镜上就会变干、变硬。浸没油在遗留几天后很难清洗，甚至可能会流到其他显微镜表面。显微镜载物台或成像区域往往会存在载玻片封片剂等，这些表面都需要进行清洁。尤其是存在可见液体或其他残留物的地方。成像后取出的样品，最好按要求保存在37°C、室温、4°C、-20°C或-80°C条件下。大多数载玻片或培养皿为了避免破裂需要在盒子里保存，且要避光。有些样品必须及时返回细胞培养箱中。注意：在从一个使用者到另一使用者的切换过程中，诸如目镜、触摸面板控件和聚焦手柄之类通常需要接触的表面，均为可能受到污染和造成感染。为了减少病毒传播，清洁这些表面非常重要！我们建议使用75%消毒酒精，清洁触摸控件面板和目镜。为了防止乙醇损坏橡胶，需取下目镜上的橡胶眼罩单独清理。 • 关闭显微镜系统电源
在关闭系统之前，留意一下下一位使用者将会何时使用。如果马上就要使用系统，可以注销用户，同时保持所有硬件继续运行。但如果一小时或更长时间不使用，建议将系统关闭。这样做可以减少激光器、灯泡、风扇等损耗，延长组件的使用寿命。关闭硬件之前，务必先要退出软件。如果先关闭硬件，后关闭软件，可能会导致发生错误，并给下一位使用者带来潜在问题。最后，如果您还有其他无法解决的问题，请拨打我们的服务热线：400-801-5530 我们会尽力为您排忧解难。
