HPLC系统滞留体积的测量和计算

1.色谱检测参数

液相色谱仪：移去色谱柱（包括保护柱，鬼峰补集柱等），用内径为0.005英寸（≈0.13mm）的约1m的管线连接进样器和检测器。检测器：UV流动相A：纯化水流动相B：0.1%的丙酮水溶液，即1ml丙酮加入1000ml纯化水中混匀即得。样品溶液：0.1%的丙酮水溶液。流速：1.0ml/mL波长：265nm柱温：25℃进样体积：10μL

流动相洗脱梯度如下：

时间（min）

流动相A（%）

流动相B（%）

0

100

0200

100

250

100

25.1

100

030

100

0

2.运行的色谱图（梯度曲线）如下：

tD=t1/2-0.5tG

（色谱图来自Thermo U3000)

3.滞留体积计算公式如下：

VD=tD*F0=（t1/2-0.5tG）*F0

式中：VD：滞留体积，mL；

tD：滞留时间，min；

F0：流速，1.0mL/min；

t1/2：检测器响应达到50%B时的时间，min；

tG：0%B-100%B梯度总时间，20min；

计算举例如下：

梯度基线起始0%B时检测器响应值为0mAU，梯度基线结束100%B时检测器响应值为200mAU，则梯度基线中间50%B时检测器响应值为100mAU，此时从梯度曲线上找到检测器响应值为100mAU时的时间即为t1/2（比如：10.851），然后带入滞留体积计算公式计算（VD）即可。

VD=tD*F0=（t1/2-0.5tG）*F0

=（10.851min-0.5*20min）*1.0mL/min =0.851mL

建议至少平行测试3针，计算VD的平均值和RSD%。

4.参考依据

现代液相色谱技术导论第3版第三章3.10小节。