HPLC系统滞留体积的测量和计算

1.色谱检测参数

2.运行的色谱图（梯度曲线）如下：

t_D=t_1/2-0.5t_G

_{（色谱图来自Thermo U3000)}

3.滞留体积计算公式如下：

V_D=t_D*F₀=（t_1/2-0.5t_G）*F₀

式中：V_D：滞留体积，mL；

    t_D：滞留时间，min；

    F₀：流速，1.0mL/min；

    t_1/2：检测器响应达到50%B时的时间，min；

    t_G：0%B-100%B梯度总时间，20min；

计算举例如下：

梯度基线起始0%B时检测器响应值为0mAU，梯度基线结束100%B时检测器响应值为200mAU，则梯度基线中间50%B时检测器响应值为100mAU，此时从梯度曲线上找到检测器响应值为100mAU时的时间即为t_1/2（比如：10.851），然后带入滞留体积计算公式计算（V_D）即可。

V_D=t_D*F₀=（t_1/2-0.5t_G）*F₀

 =（10.851min-0.5*20min）*1.0mL/min =0.851mL

建议至少平行测试3针，计算V_D的平均值和RSD%。

4.参考依据

现代液相色谱技术导论第3版第三章3.10小节。