化学考试题群内讨论（第二组，2021年4月2日）

改变流速不能改变物质的保留因子k，也不能改变选择性a，能够改变N。试图通过改变流速来优化分离时，往往没有其他因素那么明显。请参见施耐德《现代液相色谱技术导论》的表格2.2。改变柱长，流速和粒径并不能改变k。听起来这是反常识的，很多人在试图通过改变这几个要素来优化分离，其效果可能不会太明显。

关于流速，长沙晨辰的刘国柱博士提出延申问题：

流速倍增或者减半后，LC-UV， LC-CAD/GC-FID的峰面积有什么样的变化？

答案是：面积减半和面积不变。物质浓度不变，UV峰高不变，时间变短，所以峰面积减少。

CAD与MS，FID等是质量型检测器，峰高增倍，时间减半，所以峰面积没有变.

药明康德天津核心分析部王帅解释：

这是浓度型检测器和质量型检测器的差异。

ACD/Labs 阎作伟的解释：

由于流速和保留因子事实上没有关系，所以流速的建模实际上是一个复杂的过程.

用lnk=a+bx 去拟合流速是不会成功的。

因此如果要建立流速模型，请务必实验数量为4个，以保证统计学的可靠性。

疏水性强的离子对需要更多的时间来平衡。

使用疏水性较强的IPC(离子对)试剂会减慢柱平衡的过程，这在梯度洗脱时可能会产生一些问题。保留的重现性可能减低，基线可能变得不稳定，其他的分离问题也可能随之出现。因此，进行梯度洗脱时通常不建议在流动相中添加IPC试剂，特别是加入疏水性强的IPC试剂。详细内容，请参见施耐德《现代液相色谱技术导论》第七章关于IPC的描述。

氢原子与电负性大的原子X以共价键结合，若与电负性大、半径小的原子Y（O F N等）接近，在X与Y之间以氢为媒介，生成X-H…Y形式的一种特殊的分子间或分子内相互作用，称为氢键。以上内容来自百度百科.

色谱滞留体积Dwell Volume是梯度方法转移的主要差异来源。

ACD/Labs阎作伟的注释：

以下内容来自于施耐德《现代液相色谱技术导论》第九章关于梯度洗脱的方法重现性的一节的描述和翻译。

文献：

46. Reviewer Guidance. Validation of Chromatographic Methods, Center for Drug Evaluation

and Research, Food and Drug Administration (Nov. 1994).

阎作伟的进一步解释：

要解决梯度延迟带来的分离风险，应测量每台仪器的Dwell Volume，在梯度模型建立之前，精确的录入实验仪器的Dwell Volume的大小。

用色谱模拟技术可以摒弃掉增加等度时长的方法，换一个思路去考虑这个问题，本身这可以用梯度的起始比例耐用性来进行解决。目标仪器比方法开发仪器的Dwell Volumn大，可以用起始比例降低来进行模拟，在目标仪器上保留时间会增大。目标仪器比方法开发仪器的Dwell Volumn小，可以用起始比例增高来模拟，目标仪器上保留时间会减小。保留时间发生微小的变化并不足畏惧，只需分离度始终达标，不会进入分离度变差的境地即可。如图就是如此，选起始比例，应该选耐用性好的平台顶端，而不是选择悬崖一边。

另外，如果要完美的实现施耐德的增加等度延迟时间的策略，那么可以在找到最佳的一阶梯度后，主动增加等度，并了解此等度的最长可达的时间。然后再到第二台仪器上进行时间的裁剪。

但是绝对不能在建模初期的实验设计阶段就设计此等度。此时还没确定最佳起始比例，过早的将梯度延时加上，实际上对出峰较早的峰的保留时间有重大的影响，相当于锁住了其实比例变化。其模拟出的方法必须也采取同样的2min 5%等度。

梯度的倒角示意图