公开课回顾 | 从定性到绝对定量研究--靶向代谢组学

2020-06-10 06:36:25, 麦特绘谱麦特绘谱生物科技(上海)有限公司

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4月22日，绘谱学堂第八期公开课《从定性到绝对定量研究-靶向代谢组学》由深圳市绘云生物科技有限公司研发部经理周科军博士主讲，介绍了代谢组学的最前沿定量方法。参加本期课程的老师和同学们认真听讲并踊跃提问与交流，课后小编特别整理了一份Q&A分享给大家，以便您随时温习查阅。

本场课程首先阐述了非靶向和靶向代谢组学的特点，从非靶向到靶向验证思路的痛点，即需要验证的代谢物往往是不同类别的多种代谢物，可能需要多个检测方法去验证。针对这一难点，开发了新型的靶向代谢组学方法--Q300全定量代谢芯片技术，综合了非靶向代谢组学检测到的物质种类多和靶向代谢组学定量可靠的特点。该方法能够实现一针进样绝对定量检测300+种小分子物质，这些代谢物是基于贾伟教授课题组多年的代谢组学研究总结，能够用非靶向方法在各种体液和组织样本中稳定检测到的功能性小分子代谢物。每个代谢物都有标准品及匹配的同位素内标，从而保证了定量的准确可靠。最后通过应用实例带我们深入了解了Q300代谢芯片对各种类型样本的代谢物检测情况。

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Q&A

Q1. 一个Q300试剂盒能够检测多少个样本？

A1：用96孔板进样，去除8个标曲点、QC样本及blank，一次可以检测84个样本。

Q2. 代谢组学与肠道菌群结合的研究，是否必须要测血和粪便的代谢组学，能否只做粪便的代谢组学与肠道菌群结合的研究？

A2：不是必须的，肠道菌群和代谢组学检测的样本推荐来源于同一个体的相同样本类型，例如同一个体的粪便或肠道内容物；算法上对样本类型无特定要求，确保样本类型一致性得到的关联分析可以排除样本类型不同造成的误差而使结果更直观且便于解释。同一个个体的血浆（或血清）代谢数据和粪便肠道菌群数据也可以进行相关性分析，只是两者之间的相关性不如相同样本的结果易于解释。

Q3. 如果送测，需要按84的倍数来送样吗？

A3：不用按照84的倍数，根据老师自己的检测需求进行送样即可。

Q4. 如果检测短链脂肪酸、胆汁酸，送血清样品和血浆样品检测有什么区别？

A4：血清和血浆的总体上差异不大。

Q5. 如果要测差异代谢物，靶向代谢组比非靶向有没有更好？

A5：非靶向适用于发现差异性未知代谢物，但需要标准品验证，而靶向定量适用于已知代谢物的未知功能发现，因此老师可根据不同的研究目的进行选择。

Q6. 请问Q300代谢芯片可以在哪些质谱上检测，得到的数据是否能在TMBQ上分析？

A6：Q300代谢芯片适用于目前市面上主流的三重串联四级杆质谱仪，包括Waters的Xevo TQ-S，AB Sciex的5500、6500等；TMBQ是专门为Q300代谢芯片技术开发的全自动高通量定量数据分析软件，可以兼容不同厂商仪器产生的原始数据，购买Q300试剂盒的用户可在TMBQ上进行数据处理。

Q7. 能鉴定出结构的化合物只是检测出来的冰山一角，那么有意义的化合物是否会蕴藏在未鉴定出的化合物中？

A7：应该说是肯定的，所以由非靶向代谢组学去探索并鉴定未知化合物仍然具有重要的研究价值，但这条路走起来会更加艰辛。

Q8. 请问可否用全血样本取代血清的样本？

A8：如不能及时分离血清，可将收集到的血液样本放在冰上，两小时内取血清或者用抗凝管取血浆即可。

Q9. 做非靶向代谢组学，有哪些合适的内标推荐？

A9：非靶向代谢组学内标的选择，通常动物样本4-氯苯丙氨酸，植物样本用核糖醇。非靶向组学用于归一化的内标基本是一种，另外的是饱和脂肪酸甲酯用于辅助定性。

Q10. 请问如果没法判断代谢物是来自人体还是肠道菌群，如何验证是菌群通过代谢物起作用？

A10：对于找到的潜在功能代谢物，想要证明是菌群产生的，可通过以下实验来验证。首先，借助无菌小鼠和常规饲养小鼠进行对比，常规饲养小鼠体内该物质水平要显著增高。其次，可对常规饲养小鼠进行抗生素干预，干预后该物质水平应该要显著降低。通过这样的实验可以证明该代谢物主要由肠道菌群来产生。

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