2020-03-15 10:01:10, Qing Tian Zhu Cytiva(思拓凡)
亲,GST标签酶切后,酶你是怎么去除的啊?
你用哪个酶切的?
PreScission Protease。
PreScission自身是带有GST标签的,所以,同样过Glutathione Sepharose即可,可以一次性把切下来的GST标签和PreScission酶全部结合去掉。
哇,这么方便!那如果是其他酶呢?
敲黑板
具体用哪种酶切是根据你选择的是哪个表达载体,不同载体,酶切序列不同。目前,市面上常见的是三类商品化的载体:
载体名称
对应的蛋白酶
pGEX-6P-1
pGEX-6P-2
pGEX-6P-3
PreScission Protease
pGEX-4T-1
pGEX-4T-2
pGEX-4T-3
Thrombin (凝血酶)
pGEX-5X-1
pGEX-5X-2
pGEX-5X-3
Factor Xa
(凝血因子Xa)
其切割和去除方式如下:
Benzamidine是个什么柱子?
这个是苯甲脒柱子,他可以结合很多凝血酶类,所以可以吸附去掉Thrombin和Factor Xa。将这根柱子和GSTrap串联,能很方便的一起去掉切下来的GST标签和酶。
原来如此。
其实不仅是切标签的时候,如果你的样品中含有容易降解你的目的蛋白的蛋白酶,也可以先过一个Benzamidine柱子吸附掉这些蛋白酶,对于保护样品稳定也是很好的方法。
哇,今天又学到不少!
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