尿液中对硝基酚的检测——HPLC法解决方案

        对硝基酚是接触硝基苯及含对硝基苯基化合物作业工人体内的主要代谢产物，尿中对硝基酚浓度的测定，被认为是生物学监测和职业病诊断的重要指标。尿中对硝基酚的测定方法有比色法、气相色谱法及液相色谱法等。比色法操作烦琐、灵敏度差；气相色谱法虽然灵敏度高、选择性好，但是需要将对硝基酚衍生、操作复杂、不适于大批样品分析；近年来开展环境样品和尿液样品中对硝基酚检测主要使用HPLC方法，但是由于尿液中杂质干扰多，导致净化不好，干扰多，需要增加净化步骤。

尿液中对硝基酚的检测——HPLC法解决方案

        本方案适用于尿液中对硝基酚的检测，本方法定量限0.1 mg/kg。

(1) 取10 g样品，加入2 mL浓盐酸，沸水浴60 min，冷却至室温；

(2) 加入25 mL乙酸乙酯振荡2 min，6000 rpm离心2 min；

(3) 取出上清液在40 ℃水浴条件下，减压蒸至近干，再加入3 mL 50%甲醇水混匀，待净化。

ProElut Al-N 1 g/6 mL （Cat#：65306）上层

ProElut PXL 3 mL（Cat#：65920）下层

a活        化：加入5 mL甲醇、5 mL 50%甲醇水，流出液弃去；

b上        样：将待净化液加入小柱，流出液弃去；

c淋        洗：加入5 mL 50%甲醇水淋洗小柱，流出液弃去，弃去上层小柱，再用3 mL 50%甲醇水淋洗下层小柱，流出液弃去；

d洗        脱：加入3 mL甲醇，收集洗脱液；

e重新溶解：将洗脱液在40 ℃下减压蒸至近干，1 mL水溶解残渣，过微孔滤膜供HPLC分析。

色谱柱：Diamonsil C18（2），250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat#：99603）

流    速：1.0 mL/min   

进样量：20 μL   

柱    温：30 ℃

检测器：UV 360 nm

流动相： A：0.1%甲酸水    B：甲醇    A：B=60：40

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