CGT产品RCV风险怎么控？CDE最新征求意见稿深度解读

2026-07-22 10:06:11 江苏谱新生物医药有限公司

国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）7月17日发布的《可复制型病毒风险控制研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》对载体基因设计、生产用原材料、生产工艺与过程控制、质量控制及检测方法变更等提出了系统要求。该指导原则聚焦细胞治疗药品和基因治疗药品全生命周期中可复制型病毒（Replication Competent Virus, RCV）的风险控制，旨在建立系统化的RCV风险控制与评价标准。

一

起草背景

逆转录病毒载体是目前细胞治疗和基因治疗领域应用最为广泛的基因递送工具，其中γ逆转录病毒和慢病毒载体占据了核心地位。这些载体既可直接作为基因治疗产品递送目的基因至人体，也可在体外将目的基因导入T细胞、NK细胞、干细胞等靶细胞，制备基因修饰细胞用于回输治疗。

尽管上述病毒载体在设计上均为复制缺陷型，但在生产过程中，转移质粒、包装质粒以及生产用细胞中的内源性逆转录病毒基因元件，仍可能通过同源或非同源重组产生RCV。RCV一旦形成，将带来体内不可控复制、基因组随机整合、免疫原性引入等严重安全性风险。为此，CDE制定了本指导原则，覆盖从基因设计到质量控制的全流程RCV风险管控要求。

二

适用范围

本指导原则适用于按照药品管理法规进行研发和注册申报的以下两类产品：

🧬

细胞治疗药品

采用γ逆转录病毒和慢病毒载体进行体外基因修饰的细胞治疗产品，如CAR-T、TCR-T、CAR-NK等

💊

基因治疗药品

以γ逆转录病毒和慢病毒为基础开发的体内基因治疗产品

此外，复制缺陷型腺病毒载体产品、腺相关病毒（AAV）载体产品、溶瘤病毒产品等，如涉及类似的RCV风险，也可参照本指导原则中基因设计、原材料控制、工艺过程控制及质量控制等方面的技术要求执行。

三

基因设计：从源头降低RCV风险

基因设计是RCV风险控制的首要环节。指导原则分别对两种载体类型提出了具体设计要求。

3.1 γ逆转录病毒载体

γ逆转录病毒载体可通过载体生产用细胞（VPC）或瞬时转染两种方式生产。为降低RCV产生风险，载体设计至少需关注以下要点：

删除非必需基因，最小化病毒基因组
拆分质粒系统，将复制包装基因、包膜蛋白基因和转移载体基因分开构建，减少序列重叠区域
降低序列同源性，减少病毒基因与包装细胞内源性逆转录病毒基因的同源程度
优先采用自失活载体（SIN载体）设计
采用异源启动子，如EF1α、CAG、PGK1等
合理选择包膜蛋白，可根据目标细胞转导需求进行调整
引入终止密码子安全设计，一旦发生重组可有效终止病毒蛋白表达

3.2 慢病毒载体

慢病毒载体的常见骨架包括人慢病毒（HIV-1、HIV-2）、猴免疫缺陷病毒（SIV）、马传染性贫血病毒（EIAV）等。目前普遍采用多质粒瞬时转染工艺进行生产，VPC稳转生产工艺也在逐步推广。设计上应重点关注：

删除非必需基因：tat、nef、vif、vpr、vpu等
拆分必需基因至不同质粒，严格控制序列同源性
采用自失活载体结构，删除3''LTR U3区域的启动子和增强子元件
最小化与人体内源病毒的同源序列
引入内源性启动子和调控序列
整合酶改造：可改变整合特异性或设计为非整合性病毒。非整合设计建议采用多点突变以防止回复突变
稳转细胞株构建后的系统验证：需关注基因插入位点、完整性和拷贝数，建议采用单细胞测序进行评估

四

生产工艺与过程控制

RCV可能在生产全流程的多个环节产生，需建立多阶段、多节点的检测控制策略。

4.1 原材料检测

主细胞库（MCB）：需根据生产病毒的包膜嗜性选择适宜的检测细胞系。若采用病毒载体构建稳转细胞系，还需同时检测亲嗜性和兼嗜性RCV。
工作细胞库（WCB）：如MCB已完成全面RCV检测，WCB可免检。
生产终末细胞（EOPC）：建议每个临床试验批和商业化生产批均采用细胞培养法进行RCV检测。

4.2 生产过程监控

建议在病毒载体上清液、浓缩上清液、病毒成品等工艺阶段开展取样检测，优先选择最可能检出RCV的节点进行检测。

4.3 体外转导细胞检测

⚠️ 关键风险提示

对于CAR-T、TCR-T、CAR-NK等体外转导细胞产品，即使所使用病毒载体经检测合格，仍可能存在低于方法检测限的RCV，并在后续培养过程中被扩增。因此建议每批次细胞产品均进行RCV检测。

考虑到产品放行的时效性要求，可首先采用经方法学验证的快速检测方法（如PCR法）进行放行检测，同时留样备查，必要时以指示细胞培养法进行回溯确认。

五

质量控制

5.1 检测量要求

检测对象	取样量
MCB / WCB / EOPC	总细胞量的1%或1×10⁸个细胞，取较小值
细胞库上清液	总上清液的5%
体外转导细胞	总细胞量的1%或1×10⁸个细胞，取较小值

5.2 检测方法

共培养细胞的选择

共培养细胞的选择与病毒包膜类型密切相关：

病毒包膜类型	推荐共培养细胞
亲嗜性MuLV包膜	Mus dunni 细胞
GALV包膜的γ逆转录病毒	HEK293 细胞
VSV-G包膜的HIV载体	C8166 细胞

阳性对照病毒是方法开发和验证的关键要素。γ逆转录病毒已有成熟的RCR标准品（如4070A病毒、GALV SEATO病毒）。慢病毒载体方面，以HIV-1为骨架、VSV-G为包膜的载体，可选用野生型HIV、减毒HIV或条件复制型病毒作为阳性对照。

终点检测方法除传统的指示细胞法外，PERT、qPCR等方法也可用于终点检测。指导原则鼓励采用至少两种不同原理的终点检测方法，对检测结果进行相互佐证。

5.3 方法验证

临床试验申报阶段：需完成产品专属的方法学确认/验证，包括专属性、检测限及代表性样本基质干扰研究
上市申报阶段：须按照《中国药典》2025年版及ICH Q2（R2）的相关要求完成全面验证

5.4 方法变更管理

指导原则将方法变更分为两类：

变更类型	涉及内容	研究要求
高风险变更	共培养细胞变更、阳性对照病毒变更、检测原理变更等	需开展全面验证、变更前后方法对比、基质干扰评估及并行检测等系统研究
低风险变更	关键要素维持不变，仅涉及非关键试剂、设备或培养基的调整	主要关注方法比对及转移验证

六

总结与展望

纵观全文，本指导原则围绕RCV风险控制建立了完整的四维管控框架：

源头控制

通过基因设计降低RCV产生概率

过程监控

在生产各关键环节设置检测节点

终末放行

建立严格的质量控制标准，确保批批产品安全

动态管理

科学评估方法变更，确保质量控制的持续性和可比性

《指导原则》初步建立了以风险评估为基础，覆盖基因设计、生产用原材料、工艺过程、质量检测及方法变更的RCV控制框架，为细胞与基因治疗产品相关研究和技术评价提供了更加明确的参考。

从行业实践看，RCV风险控制涉及载体设计、细胞株开发、工艺开发、分析方法及生产质量管理等多个专业领域，需要研发企业、CDMO机构和检测实验室在项目早期建立协同机制。

随着相关技术要求逐步完善，CGT产品的RCV控制将更加重视研究方案的整体性、检测方法的适用性以及全生命周期数据之间的连续性。企业应结合具体产品和工艺特点，基于充分的研究数据建立科学、合理且可执行的风险控制策略。

本文根据国家药品监督管理局药品审评中心《可复制型病毒风险控制研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》整理，仅用于行业交流，不构成注册申报、质量管理或产品开发的技术依据。相关要求请以监管部门最终发布的正式文件为准。

可点击“阅读原文”下载该文件。

企业实践

谱新生物慢病毒CDMO服务：贯穿RCV风险控制全链路

本次指导原则聚焦慢病毒与γ逆转录病毒载体的RCV风险控制，从基因设计、原材料、生产工艺到质量检测提出了系统性要求。谱新生物搭建了GMP级别悬浮无血清慢病毒生产平台，提供从载体系统到IND申报的端到端CDMO服务，其技术能力与指导原则关注的各环节高度契合。

RCV风险控制贯穿慢病毒载体从设计、生产到放行的全流程。谱新生物慢病毒CDMO服务以悬浮无血清工艺为基础，以四质粒拆分设计和14项质量检验体系为抓手，可为CAR-T、TCR-T、CAR-NK、UCAR-T等细胞药物企业提供从载体授权到IND申报的一站式RCV风险控制解决方案。

参考文献

国家药品监督管理局.《可复制型慢病毒检测共性问题与技术要求》[EB/OL]. 2024年10月.
国家药品监督管理局.《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》[EB/OL]. 2022年5月.
ICH. Q5A (R2) Viral safety evaluation of biotechnology products derived from cell lines of human or animal origin [EB/OL]. Nov 2023.
国家药品监督管理局.《免疫细胞产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》[EB/OL]. 2022年6月.
国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 2025版. 北京：中国医药科技出版社，2025.
FDA. Testing of retroviral vector-based human gene therapy products for replication competent retrovirus during product manufacture and patient follow-up[EB/OL]. Jan 2020.

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谱新生物，定位为全球细胞药物整体解决方案提供商。谱新生物聚焦细胞药物领域，搭建了针对CAR-T、TCR-T、CAR-NK、TIL、HSC等不同的细胞药物类型，建立了专用的HiPlas™载体系统、HiLenti®悬浮无血清病毒生产平台和HiCellx ®高转导效率的细胞工艺开发平台和质量控制平台。平台已支持多个合作伙伴成功孵化了多款CAR-T、TCR-T、CAR-NK、HSC等药物，总计获得了25+个来自NMPA、EMA、FDA等审评机构的临床批件，支持了多个国际多中心临床试验项目的开展。

作为全国首个基于MAH制度下获得细胞药物全流程受托生产《药品生产许可证》C证的CDMO企业，谱新生物于2024年获得了全国首张细胞药物欧盟QP符合性声明。谱新生物结合进出口平台、FDA DMF备案的现货GMP级的包装质粒（HiPlasTM LentiHelp Plasmids for NK/T），全面支持细胞药物跨境技术转移和CAR-NK、γδT、UCAR-T等通用型细胞药物的全球供应。谱新生物致力于让更多项目更早更快地达到下一里程碑，把更多中国细胞药物推向国际市场，造福更多患者，让细胞药物谱写生命新篇章。