【应用分享】调制乳粉中合成着色剂的快速检测（GB 5009.35-2023）

调制乳粉提取：准确称取试样2 g (精确至0.001 g) ，置于50 mL具塞离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋1 min，超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取10 min，8000 r/min离心5 min，弃去上清液，油脂含量较高的可重复提取一次，弃去上清液，加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50 ℃超声或振摇 (速率≥250 r/min) 提取20 min，8000 r/min离心5 min (若离心后提取液仍然浑浊，可转入高速离心机专用管，15000 r/min离心5 min) ，取上清液置于50 mL容量瓶中，每次加入约5 mL~10 mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，即得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃氮气浓缩至3 mL左右，分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液。

SelectCore WAX固相萃取柱 150mg/6mL

活化：依次使用6 mL甲醇、6 mL水活化固相萃取柱，保持柱体湿润；

上样：活化后立即将步骤2中的待净化液以2~3秒/滴的流速加载到固相萃取柱上；

淋洗：依次用6 mL 2%甲酸水溶液和6 mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，真空抽2 min至柱体近干；

洗脱：用6 mL 2%氨水甲醇溶液洗脱，分两次加入，每次3 mL，流速低于2~3秒/滴，收集洗脱液，于50 ℃氮气浓缩至近干，准确加入2 mL pH为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解，溶液用针筒过滤器，孔径0.45 μm的滤膜过滤，弃去2~5滴初滤液，取续滤液作为待测液。

图2、520 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图

1.苋菜红  2.新红  3.胭脂红  4.日落黄  5.诱惑红  6.酸性红  7.赤藓红

图3、610 nm波长下的合成着色剂标准品、调制乳粉样品、调制乳粉样品加标 (20 mg/kg) 对比图

1.靛蓝  2.亮蓝1  3.亮蓝2

由实验谱图和加标回收率结果可以看出，SelectCore WAX固相萃取柱可以有效去除乳粉中基质干扰，调制乳粉基质中11种合成着色剂的回收率均在85%~105%之间，结果准确可靠；采用ChromCore C18色谱柱和改进的液相方法进行检测，着色剂峰形尖锐对称，分离度也完全满足定性和定量要求。

实验注意事项

1）靛蓝比较容易降解，储备液有效期短，不建议和其它着色剂配成混标，建议现配现用。

2）氨水易挥发，建议洗脱液现配现用。

3）氮吹时不建议气流过大，氮吹至干即可，不建议氮吹时间过长或过干。

4）如果遇到赤藓红的回收率较低，可以选择用乙酸铵：甲醇=9:1 (pH=9) 作为复溶液，可以提高赤藓红的回收率。