一块96孔板可检测一千多个样本？荧光编码+光谱流式，让高通量磷酸化检测效率倍增

做过药物筛选流式检测实验的老师都懂，不同处理组、不同时间点的大量样本的处理和检测真是让人烦恼，特别是做磷酸化检测实验的时候：细胞固定破膜一步不能少，一个个样本进行抗体标记操作繁琐并且试剂消耗惊人，这还没完，一想到处理完的这么多样本要依次上机检测，这时长让人不禁开始怀疑人生……有没有办法让几十个样本“挤”进同一个管子，一次性上机搞定？

答案是，有。英国约克大学团队基于CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块，开发了一套双色荧光蛋白条形码（Protein Barcoding）工作流程：只用Pacific Blue和DyLight800两种染料，通过不同浓度梯度组合生成16种独特编码，把不同处理条件的样本提前标记、混合、一起染色上机。最终，一块96孔板理论上可以跑出1,536个样本的惊人通量。

蛋白条形码的核心思路是在抗体染色之前，先用NHS酯类染料（Pacific Blue和DyLight800）与细胞内蛋白质共价结合，为不同样本打上专属的荧光“标签”。通过精心设计的4×4浓度矩阵，两种染料即可组合出16个互不重叠的光谱标签（图1）。

将16组荧光编码标记的样本混合后作为一个整体进行后续的PE/APC标记的磷酸化抗体染色，上机后利用CytoFLEX mosaic 88的光谱解析能力，软件自动将混合信号“解复用”，还原每个原始样本的真实磷酸化表达水平。

条形码方案最大的顾虑是：编码染料会不会“污染”目标检测通道？从光谱图来看，得益于CytoFLEX mosaic超宽的波谱检测范围，Pacific Blue（~450 nm发射峰）在短波长与DyLight800（近红外~800 nm）长波长分别占据可见光谱的两端，完美避开了eGFP（~510 nm）、PE（~575 nm）和APC（~660 nm）的发射窗口（图2）。

实际数据也验证了这一点：无论样本条形码组合如何，eGFP报告基因表达强度和PE/APC磷酸化抗体染色信号均保持高度一致，说明条形码标记过程对后续免疫染色没有任何干扰。

这套工作流的“降本增效”能力直接拉满：

之所以能实现如此干净的16重编码解析，背后功臣是CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块。它基于全光谱信号采集与先进的解混算法，能够精准区分光谱高度相近的染料——哪怕是Pacific Blue这种常用BV421通道的染料，与细胞自发荧光或其他紫外激发的荧光素也能清晰分离。

同时，该模块依托CytoFLEX平台灵敏的散射光检测能力，对于细胞碎片较多的固定破膜样本依然能稳定圈出主群。其核心优势在于专有的混合泊松光谱解析算法，能够精准区分光谱特征相似的染料，即使Pacific Blue与细胞自发荧光信号重叠，也能通过光谱解混清晰剥离，确保条形码信号提取的准确性。

对于从事信号通路磷酸化研究、药物高通量筛选、免疫细胞功能监测的实验室来说，蛋白条形码+光谱流式的组合拳无疑是一剂“生产力猛药”。

它用极低的试剂成本换取了极大的通量提升，而且无需额外购买昂贵的专用编码试剂盒——Pacific Blue和DyLight800均为常规流式染料，门槛极低。

CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块正在让这种曾经专属于大型中心实验室的高端技术变得触手可及。

High-Throughput Multiplexed Single-Cell Analysis Using Protein Barcoding with

Pacific Blue and DyLight800 on the CytoFLEX mosaic 88 Spectral Detection Module

2026-GBL-EN-109712-v1