【厌氧培养技术指南】产气荚膜梭菌培养方法及注意事项

2026-03-31 11:35:14, DW 杭州大微生物技术有限公司

指南目录：

1、产气荚膜梭菌概况

2、培养方法

3、检验注意事项

产气荚膜梭菌是一种革兰氏阳性厌氧菌，广泛分布于污水、土壤等环境及人和动物肠道中。

既有“荚膜”护体，又可产生“芽孢”休眠，可以抵抗高温、冷冻、高压等各种环境不利条件，待到适宜的生存条件时，便可结束休眠状态，繁殖产毒。

GB 4789.13-2012《食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验》中规定了产气荚膜梭菌的检验流程。

厌氧培养是产气荚膜梭菌检测的关键环节，通过TSC琼脂在36℃±1℃厌氧环境中培养20~24小时，可特异性形成黑色菌落，排除好氧菌干扰并富集目标菌。

产气荚膜梭菌培养难点：

1、对氧十分敏感，暴露在空气中时间过久即死亡

2、若厌氧环境不严苛，易受其他杂菌干扰

3、与其他梭菌形态相似，仅凭形态难以区分

产气荚膜梭菌显微图

产气荚膜梭菌培养流程

一、样品制备及前处理：

原始样品经初步稀释（25g（mL)+225mL稀释液）均质并系列稀释后（根据样品中菌含量）倾注至TSC琼脂平板进行产气荚膜梭菌厌氧分离培养

二、培养：

打开DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统的电源开关

将处理好的平板放入系统配套厌氧罐内，插入厌氧培养专用催化剂，连接罐体与主机

选择“厌氧培养”操作程序

设备启动，气体置换程序自动运行，90秒后即可生成厌氧环境

将培养罐脱离主机，放入36 ℃±1 ℃的环境中培养20-24h

三、得出结论：

可通过生化方法或更为快速简便的「DW-MS 5500飞行质谱微生物快速鉴定系统」进行鉴定

产气荚膜梭菌蛋白谱图

实验操作注意事项

1、分离培养：TSC琼脂的“双层”接种

在TSC琼脂平板上进行分离时，倾注样品后，务必再覆盖一层培养基，使样本与空气彻底隔绝开；其次可保护亚硫酸盐还原反应不受抑制，避免本该变黑的菌落呈现灰白色，造成误判。

2、全程关键：严格维持厌氧环境

由于产气荚膜梭菌对氧气敏感，从分离培养到鉴定操作的整个过程中，必须时刻注意维持厌氧条件，以确保目标菌的存活与生长，避免假阴性结果。

实践证明，DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统+生物安全柜组合的解决方案，由于系统能够生成严格的厌氧环境、耗时极短，且接种及培养均在生物安全保护下进行，可在兼顾培养效果的同时保障生物安全。

因此，DW-100A-K Plus智能厌氧微生物培养系统+生物安全柜组合可作为产气荚膜梭菌检验的日常方案。

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关于杭州大微生物技术有限公司：

杭州大微生物技术有限公司（简称“杭州大微”）是微生物仪器研发、生产及销售的高新技术企业，总部位于杭州良渚国际生命科技小镇。创立于2012年，已获7项国家专利和17项软件著作权，致力于推动中国工业微生物检测实践的“快速、简单、自动化”和标准化！

2023年，杭州大微参与创办先进微生物分析技术研究所（隶属于海宁高研院），致力于成为先进微生物分析技术领域的重要科技力量。

荣誉资质：杭州市“雏鹰计划”企业、中国食源性微生物检测技术创新战略联盟成员、2023世界生命科技大会创新10强、参与国家级项目2项、浙江省重点实验室项目2项

“杭州大微”品牌DW系列微生物仪器：微生物样品前处理自动化系列、厌氧及微需氧微生物培养系列、微生物鉴定分型溯源系列、微生物快速检测系列、质谱鉴定系列。

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ATIM先进所的5大科研方向：

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2、公共卫生领域病原菌防控研究

3、工厂微生物污染监测控制研究

4、传统酿造与现代发酵菌群研究

5、合成生物学领域高通量筛选技术研究