为什么色谱柱居然能和积分有关系？

其实要搞明白两者之间的关系，我们需要把问题转换一下：如果它们之间没有关系的话，是否“色谱柱和积分”影响或代表的其他因素之间是有联系的？首先，我们从色谱柱来看，色谱柱之间的差异主要取决于其固定相类型、粒径、长度、次级基团等，这些差异影响的是什么？对于同一化合物来说，不同的色谱柱对其峰形、出峰时间都会有影响，当然这种影响是与流动相的组成和比例共同作用的结果。

我们再看积分，这是一个再简单不过的操作了，本质就是在基线位置画一条线，与峰形围成一个密封区域让软件计算面积，也就是说积分其实代表的是峰面积。那么，问题好像就出来了，因为色谱柱的不同，影响了峰形，所以也就影响了积分。但想想好像也不太对，因为即使色谱柱对物质的保留能力较低，峰形宽一点，顶多也就是在基线位置画的线长一点而已，毕竟浓度一样的情况下，峰面积肯定还是一样的呀。那到底怎么样才能找到两者的关系呢？

想到这里，其实我们忽略了一个很常见但基本不会注意的问题，那就是上面说到的出峰时间。不同的色谱柱会导致出峰时间不同，这点没什么争议，但出峰时间能影响峰面积吗？是的，出峰时间会影响峰面积。我们把这个问题再换一换，拿常用的二极管检测器为例，对于同一支色谱柱，如果我们改变流动相比例，使目标物延迟出峰，我们都知道目标物的峰形会变宽。因为保留时间越久，目标物越容易在流动相中扩散，但因为浓度不变（峰面积不变），所以峰高会变矮。但事实上，却会出现下图的情况，峰面积S2＞S1。

为什么出现这种“违反常识”的情况，其实是我们很多时候没有注意到峰面积的变化而已。对于经常做同一个项目的人来说，他们会更容易注意到这个问题，因为他们对出峰时间和峰面积会更加敏感。这个问题的本质其实是因为我们忽略了色谱图中的一个重要因素，那就是“速度”。试想一下，如果只是给出一张短跑运动员冲过终点的照片，你能够看出哪个运动员的速度更快吗，显然不行，但我们看不出，并不代表“速度”是不存在的，色谱图也是这样。出峰时间越晚，意味着物质在色谱柱里面跑的更慢，也就是说，通过终点的速度也会越慢。但速度慢了又有什么关系呢，浓度不变，也就是通过终点的“人数”是不变的呀，那峰面积应该还是不变才对。

其实这与检测器的反应时间有关，检测器相当于是裁判员的眼睛，如果运动员都跑得很快，像苏炳添一样快，同时又有一大堆人同时以这个速度通过终点，那么就都叠在一起了，裁判员的眼睛都看不过来，就有可能会出现漏数的情况。反之，如果大家都跑得很慢，裁判员就可以慢慢的数，自然也就数得更加准确。再看本文的问题，逻辑就很明显了，不同的色谱柱影响了目标物的出峰时间，也就是目标物通过终点的速度，所以影响了峰面积。

说到这里，可能有很多人会不相信，认为是强行解释，作者建议读者们都可以用自己平时的项目的标准品来尝试下，看看延迟或提前出峰时间，峰面积是否会有变化，也可以看看其他的检测器是否也有这样的情况出现，毕竟不同的检测器原理不一样，然后把结果放在评论区。或者如果大家对这个问题还有其他的看法，也可以互相学习讨论。