常用抗体鉴定多能干细胞方法合集！

通过荧光标记的一抗或二抗与干细胞特异性蛋白结合，在显微镜下观察荧光信号，可直观定位目标蛋白的表达位置（如细胞膜、细胞质或核内）和信号。

一般我们需要检测相关标记物是否存在帮助鉴定新分化的iPSC 和ESC 细胞系。要维持未分化的干细胞状态，它们都需要关键转录因子的表达，如Nanog 和OCT44 。这些转录因子可以调控影响细胞分裂、分化和发育的基因。除了上述转录因子外，PSC 还表达一组特定的细胞表面蛋白，如TRA-1-60、TRA-1-81、SSEA3 和SSEA4。一般为提高iPSC 集落质量的可信度，建议不只确认一或两种，而是多种PSC 标记物的表达。

图1. 人ESC H9 细胞系中的NANOG 和LIN28 以及人iPSCHEL11.4 细胞系中的SOX2 的免疫荧光分析。采用NANOG、LIN28 和SOX2 单克隆抗体以及DyLight™ 488 山羊抗小鼠对滋养层培养的细胞进行染色。

图2. 免疫荧光分析EB 分化的常见标记物中胚层平滑肌肌动蛋白 (SMA)、内胚层原始肝细胞标记物甲胎蛋白 (AFP) 和外胚层神经元细胞标记物β-III 微管蛋白。

成像方法都是定性检测，而流式细胞术则提供了一种定量检测方法，检测表达标记物的细胞数量以及表达强度，揭示了标记物的下调或群体中的异质性。值得提醒的是，基于流式检测原理，流式抗体相对用量较多且不适合检测低表达的蛋白。

流式细胞术中最常用的表面标记物有SSEA4 和TRA-1-60；对细胞进行固定和透化处理后，也可以检测诸如Nanog 和SOX2 等核标记物 ( 图3)。为了验证PSCs 细胞系的多能性，可以要对基因产物进行检测，确保存在标志自我更新功能的基因产物或不存在体细胞基因产物。

图3. 采用TRA-1-60 、NANOG 、抗SSEA4  和SOX2 单克隆抗体对滋养层培养的人ESC H9 细胞系进行染色。

图4. WB分析Nanog转录因子。采用Nanog抗体和羊抗小鼠的HRP标记二抗进行WB检测。