耗材专区 | Empore™ C18 96孔板在肽段脱盐过程中的应用

2025-04-11 11:08:41 北京莱伯泰科仪器股份有限公司

前言
在蛋白质组学研究中，C18 96孔板被广泛应用于肽段脱盐和纯化步骤，尤其适用于高通量样本处理，为下游质谱分析提供高质量样本。


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Empore™ C18 96孔板简介


Empore™ C18膜式固相萃取96孔板专为高通量固相萃取而设计，板的每个孔内都有一个有效直径为5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的预过滤层被压环固定到每个孔的底部，预过滤层可有效提高大多数生物样品前处理流速。有效直径是指可用于样品处理的萃取膜实际使用直径。标准板的单孔储液体积为1.2mL，深孔板的单孔储液体积为2.5mL。如果样品或试剂的体积超过板的单孔储液体积，可分批次加液。

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Empore™ C18 96孔板技术优势


  • 高通量、低样本损失、兼容自动化设备。
  • 致密且稳定的膜结构消除了散装填料孔板中存在的沟流和孔洞的问题，数据重现性更高。
  • 薄薄的膜结构更易被洗脱，回收率更高。

03


C18 96孔板脱盐原理


C18键合相（十八烷基硅烷）通过疏水相互作用吸附肽段，去除盐分、去垢剂等杂质，随后用有机溶剂洗脱肽段，实现脱盐和浓缩。

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实验前准备


1、材料与试剂
  • CDS Empore™ C18 96孔板（货号：70-2007-3982-2EA，规格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）

  • 缓冲液：

活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;

洗涤液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;

洗脱液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。
  • 真空抽滤装置或离心机（适配96孔板）
  • 肽段样本（酶解后的复杂混合物）

2、板预处理

  • 活化：每孔加入200μL 100% ACN，静置1分钟，抽干。

  • 平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重复2次，确保填料亲水化。

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脱盐步骤


1、上样
  • 将肽段样本（溶于0.1% TFA）加入孔中。
  • 注意：样本pH需≤3（TFA调节），以增强肽段与C18的结合。
2、洗涤
  • 每孔加入200μL洗涤液（0.1% TFA/5% ACN），重复2-3次，去除盐分和极性杂质。
  • 真空抽干或离心彻底去除液体。
3、洗脱
  • 加入50-100μL洗脱液（如0.1% TFA/50% ACN），静置1分钟，收集洗脱液至收集板。
  • 可重复洗脱1次以提高回收率。
4、干燥
  • 合并洗脱液，真空离心干燥（如SpeedVac）后溶于质谱上样缓冲液（如0.1%甲酸）。

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关键参数优化


1、流速控制
  • 手动操作时避免流速过快（依赖重力或离心）；自动化平台可调至1mL/ min。
2、有机相比例
  • 洗脱ACN浓度需优化（通常50-80%），过高可能导致疏水性杂质共洗脱。
3、样本载量
  • 避免超载（肽段载量：100μg左右/孔），否则会导致回收率低。

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应用场景


1、质谱前处理
  • 去除LC-MS/MS样本中的盐（如SDS、尿素、磷酸盐）。
2、分级洗脱
  • 与高pH反相分馏联用，提高肽段覆盖度。
3、自动化整合
  • 适配液体处理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 实现高通量。



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