微生物实验全流程：取样、制备、稀释、接种与培养方法汇总

无论你是实验室萌新还是资深研究员，这篇指南都能成为你的“实验外挂”！

梯度稀释、微生物质谱…从基础操作到高端设备，附应用案例，助你实验效率翻倍！

‌微生物取样的核心原则是‌无菌操作‌和‌代表性‌。根据样品类型选择合适的方法：

‌‌空气微生物‌：

沉降法‌：将平板培养基暴露在空气中一定时间（通常5-30分钟），收集沉降的微生物。

撞击式采样器‌：通过气流将微生物撞击到培养基表面，定量分析空气微生物浓度。

DW-20型 空气浮游菌采样器

‌水样‌：

采集前需充分混匀液体，用无菌瓶取中段水样（避免表面或底部杂质）。若水样含菌量高，需预先稀释（见下文稀释方法）。

DW-28系列 水中微生物膜过滤装置

‌土壤/沉积物‌：使用无菌铲或钻取器取表层以下5-10 cm的样品，避免表层污染。样品需尽快处理或冷藏保存（4℃）。

‌表面拭子‌：用无菌棉签蘸取生理盐水，在目标表面旋转擦拭，放入无菌管中保存。

体液/组织‌：手术器械需灭菌，取样后迅速转移至无菌容器，避免暴露于空气中过久。

‌‌固体样品‌（如面包、肉类）：切取内部组织（避免表面污染），粉碎后悬浮于无菌生理盐水。

‌液体样品‌（如牛奶、果汁）：直接取10 mL加入90 mL无菌缓冲液中（10倍稀释）。

DW-JURAY系列 微生物样品自动重量稀释仪

‌固体样品‌：加入无菌玻璃珠和缓冲液（如磷酸盐缓冲液），用均质器振荡至完全分散。

‌粘稠样品‌（如酸奶）：用无菌勺搅拌后稀释。

DW-4系列 拍击式均质器

‌食品/环境样品‌：可能含防腐剂或抑菌成分，需通过以下方式处理：

过滤法‌：用0.45 μm滤膜去除颗粒，收集滤液中的微生物。

中和法‌：添加中和剂（如硫代硫酸钠中和余氯）。

‌对低浓度微生物样品，可预先在液体培养基中孵育（如6-24小时），增殖目标菌群。

‌稀释的目的是将高浓度样品中的微生物分散到可计数的范围（通常30-300 CFU/平板）。

‌操作步骤‌：

‌准备稀释液‌：常用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液（PBS）。

‌梯度稀释‌：取1 mL原液加入9 mL稀释液中，混匀为10⁻¹稀释度。

重复步骤，依次得到10⁻²、10⁻³等梯度（每次更换移液枪头）。

‌选择稀释度‌：根据样品预估浓度选择3个连续稀释度（例如10⁻⁵、10⁻⁶、10⁻⁷）。

‌关键技巧‌：移液时枪头需浸入液面以下，避免气泡产生；每稀释一步需充分涡旋混匀（或手动震荡30秒）。

DW-9系列 微生物试剂分液器

‌目的‌：分离单菌落。

‌操作‌：用接种环蘸取样品，在平板表面划“之”字形线（分4个区域，每区灼烧接种环冷却后再划下一区）。适用于细菌和真菌的纯化培养。

DW-6系列 接种环灭菌器

‌‌目的‌：定量计数菌落。

‌操作‌：取0.1 mL稀释液滴在平板中央，用无菌涂布棒均匀涂开。适用于需氧菌的计数。

DW-16型 自动细菌涂布接种仪

‌目的‌：适合兼性厌氧菌或高温度敏感性微生物。

‌操作‌：将1 mL稀释液与约15 mL冷却至50℃的熔融培养基混合，摇匀后凝固。菌落分布在培养基内部，避免表面污染。

目的：高效估算样品中微生物浓度，减少手动稀释步骤和人工操作步骤，提高效率。 

操作：仪器将会自动完成螺旋接种，菌落将沿螺旋轨迹分布于平板表面，中心密度高、外周密度低。

DW-L2000型 全自动微生物平皿螺旋接种仪

‌‌通用培养基‌：营养琼脂（细菌）、PDA（真菌）、LB培养基（大肠杆菌等）。

选择性培养基‌：加入特定抑制剂或指示剂（如SS琼脂分离沙门氏菌）。

‌细菌‌：37℃（中温菌），培养24-48小时。

‌真菌‌：25-30℃，培养3-7天。

极端环境微生物‌：需调整温度（如嗜热菌55℃）或气体条件（厌氧罐）。

‌需氧菌‌：普通培养箱。

厌氧菌‌：使用厌氧袋/罐，或添加还原剂（如巯基乙酸盐）。

‌微需氧菌‌：5% O₂、10% CO₂环境（如弯曲杆菌）。

嗜CO₂菌：高浓度CO₂环境（如嗜肺军团菌）。

DW-100A-K系列 智能厌氧微生物培养系统

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony forming units，CFU）表示。

选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。

DW-V系列 全自动菌落计数仪

微生物的生长引起培养物混浊度的增高，通过测量悬浮液中的微生物细胞散射光来反映微生物数量。

DW-MF30型 细菌麦氏浊度仪

包括革兰氏染色及镜检。可以初步鉴定微生物的革兰氏阴阳性、球菌或杆菌。

DW-GS100型 全自动革兰氏染色仪

DW-3系列 生物显微成像系统

通过生化反应原理（包括酶底物反应、糖利用反应、同化反应、氨基酸实验等）捕获细菌的生化表型特征，对微生物进行鉴定。

DW-M80型 自动微生物生化鉴定系统

通过采集微生物菌体经软电离后产生的蛋白质、多肽等组分的加氢离子质谱，与标准菌株质谱进行比较分析而得出鉴定结果。

DW-MS 5500型 飞行质谱微生物快速鉴定系统

基于微生物的DNA序列的鉴定，包括全基因组测序、16s rRNA/ITS序列分析、DNA（G＋C）含量百分比测定、DNA-DNA杂交及靶基因PCR等。

从理论到实践，从手动到智能。

解锁这份微生物实验的“百科全书”，让每一次实验都成为技术进阶的基石。

探索微生物世界的奥秘，杭州大微与您同行！

戳原文，更有料！