【王老师带你玩转FlowJo®】之软件最新升级-更简单、更智能的细胞周期分析平台

 细胞周期实验原理 

   核酸染料和DNA分子能够特异性结合。细胞周期的不同阶段，DNA含量不同。仪器检测到的核酸染料的荧光强度和DNA含量成正比，通过对检测结果进行分析可以得知各个细胞周期的分布状态以及占比。

 FlowJo®细胞周期分析平台操作解析 

1.首先圈出单细胞群体

2.调出细胞周期分析平台工作界面

3.横坐标切换成相应DNA染料通道

FlowJo®细胞周期分析平台参数解析

1.周期平台参数注释

2.生成拟合结果之后，我们如何判定周期拟合结果是否理想?

    如下图所示，理论上模型曲线和样本曲线拟合越一致越好。周期拟合结果的好坏还可以通过RMS值进行判定。RMS值越小表明拟合结果越好。RMS没有确定的范围，是一个相对值，比如下图拟合结果对应的RMS值为2.86，结果较好。拟合较差时，可以尝试更改拟合模型。

3.两种拟合模型如何进行选择？

    FlowJo®细胞周期分析平台内嵌了两种拟合模型：Watson(Pragmatic)和Dean-Jet-Fox。这两种模型没有实质性差异，我们可以选择任意一种进行拟合分析。或者在进行拟合时，我们可以比较两种模型分别对应的RMS值，选择RMS值较小的分析模型（如下图我们可选择Watson模型）。

4.如何更改限定条件（建议根据实际拟合结果进行调整）？

    在FlowJo®细胞周期分析模型中我们可以对G1期峰值和G2期峰值（Mean值）进行限定，同时也可以对CV值进行限定。

G1/G2期峰值限定：

    理论上，G2期DNA含量为G1期DNA含量的两倍，所以G2期峰（Mean值）为G1期峰的两倍（实际由于仪器设定等影响，比如电压过小，会导致G2/G1小于2）。

我们有两种更改方式：

①根据G1峰和G2峰的实际位置，选择相对固定的峰值。如果G1期峰值相对固定，可以选择G2 Peak=2G1。如果G2期峰值相对固定，可以选择G1 Peak=0.5G2。

②我们也可以手动调整，根据上述原则，在对话框中输入相应数值。

 CV值限定 

②手动输入固定的CV值，一般建议参考整组样本中拟合最佳样本的CV值进行设定，同一组样本的CV值变化很小。

FlowJo® 细胞周期分析平台分析结果导出

    如下图所示，我们可以选中细胞周期分析程序，通过拖拽导入到Layout Editor界面，在Layout Editor界面我们可以进一步对分析结果进行编辑。

    还可以选中CC Gates in Workspace对话框，在工作界面自动圈取相应周期群体。通过拖拽在Layout Editor中进行叠加显示。

    在Layout Editor界面选中目标图片右击-选择Histogram子按钮可以切换多种呈现方式，使得多样本比较更容易，更直观。

(以上图片可点击放大查看）

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