盛夏就餐，凉皮谨防米酵菌酸！

据媒体报道，台北市近日发生一起食物中毒案，经台北市卫生部门证实，这起“宝林茶室”中毒案重症患者共7人，有6人死亡。根据尸体解剖分析，确认检测到有毒物质米酵菌酸成分。

米酵菌酸由发酵的谷物、椰子及食用菌等受污染后产生，毒性强烈，无色无味，且在高温下稳定，主要影响肝脏、脑、肾等重要器官，只需1毫克即可致命。

在炎热的夏季，天气高温潮湿，类似河粉、肠粉、粿条、凉皮等湿米粉以及泡发的银耳、木耳等食品，容易滋生椰毒假单胞菌从而产生米酵菌酸毒素，而这些食品都有一个共同点，就是要经过长时间的浸泡和发酵。

因此在夏季，生湿面制品和酵米面制品中米酵菌酸的检测是及其重要的。美正生物高度重视米酵菌酸的检测，针对凉皮基质推出新的应用方法，为百姓的食品安全尽一份力。

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01

仪器设备

PerkinElmer QSight 液相色谱串联质谱仪

PerkinElmer LC 300 高效液相色谱-紫外检测器。

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02

试剂材料

甲醇、甲酸、乙腈为色谱纯，氨水为分析纯；

甲醇-氨水溶液：量取 800mL 甲醇，加入 10mL 氨水，用水稀释并定容至 1000 mL，混匀；

2%甲酸甲醇溶液：吸取 2mL 甲酸，用甲醇稀释至 100mL ，混匀；

PolyPlus MAX 固相萃取小柱：60 mg/3 mL，P/N：CSS0025。

Robussil C18 Plus 色谱柱：5µm ，4.6 × 250 mm ，P/N：CSH952505-P。

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03

样品制备

样品提取

鲜（湿）试样经剪碎，匀浆后称取 10g ，加入 80mL甲醇-氨水溶液，混匀，室温下避光 浸泡1h ，置于超声波振荡器中超声提取30min，8000r/min 离心 5min（也可以直接过滤），取上清液或滤液 40mL ，置50℃ 水浴中减压浓缩至约 3mL，待净化。

样品净化

将待净化液全部转移到用5mL甲醇和5mL水已活化的固相萃取柱中，依次用 5mL水和 5mL甲醇淋洗，弃去流出液，抽干萃取柱，再用 6mL 2%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于50℃水浴中氮吹至近干，然后加入1mL 75%甲醇水溶液，涡旋溶解，混匀，经有机PTFE针式滤器过滤后进行HPLC分析 或LC-MS/MS分析。

基质混合标准工作溶液配制

取高浓度米酵菌酸标准溶液，用空白样品基质溶液稀释75ng/mL和750ng/mL的基质混合标准工作溶液。

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04

色谱条件

HPLC条件

色谱柱：Robussil C18 Plus ，5 µm ，4.6 × 250 mm；

流动相A：甲醇+水=75+25 ，水用冰乙酸调 pH 至 2.5；

流速：1.0 mL/min；

柱  温：25℃;

进样量：50 µL；

LC-MS/MS条件

色谱柱：Kinetex F5 ，2.6µm ，3.0×50mm；

流动相A：0. 1%甲酸水；

流动相B：乙腈；

柱  温：40℃;

进样量：10µL；

梯度洗脱：

液相色谱梯度洗脱条件

质谱条件

离子源：ESI- ；

雾化气：200；

电喷雾电压：-4500 V；

离子源温度：275℃; 

反吹气：80；

质谱接口温度：280℃;

采集方式：多反应监测(MRM)。

质谱参数

注：本实验中所有离子对都以第一组离子对作为定量离子对。

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05

实验结果

凉皮基质加标回收实验结果

（HPLC ，添加水平 0. 15 mg/kg ，n=3）

凉皮基质加标回收实验结果

（LC-MS/MS ，n=3）

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06

实验谱图

0.75 μg/mL 米酵菌酸标准工作溶液色谱图

凉皮基质空白色谱图

0. 15 mg/kg 凉皮基质加标色谱图

LC-MS/MS 图谱

70 ng/mL 米酵菌酸标准工作溶液色谱图

50 ng/mL 米酵菌酸凉皮基质混合标准工作溶液色谱图

凉皮基质空白色谱图

0.015 mg/kg 凉皮基质加标色谱图

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07

实验结论

本实验参考GB 5009.189-2023建立了凉皮中米酵菌酸的检测方法，并结合HPLC 对加标量为0. 15 mg/kg的凉皮样品进行了检测。结果表明，使用MAX 固相萃取小柱对凉皮基质进行净化，米酵菌酸回收率均满足检测要求且RSD 小于10% 。说明该方法适用于凉皮中米酵菌酸的检测，且方法稳定。此方法检出限为0.016 mg/kg ，定量限为0.055 mg/kg，使用LC-MS/MS 检测检出限为0.00012mg/kg ，定量限为0.00040 mg/kg 。

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