直面食品安全新标准—食品中维生素的含量测定（II）

2024-02-04 11:32:31 科诺美（北京）科技有限公司

前言

维生素是机体维持正常代谢和功能所必须的一类化合物，一般无法由生物体自身合成，需要通过饮食等手段获得。

B族维生素作为辅酶，对人体内糖、脂肪和蛋白质的代谢起着至关重要的作用。其中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9、维生素B12等为人体常用。维生素C（又名抗坏血酸）具有一系列的生理功能，如增强人体免疫功能、预防和治疗缺铁性贫血、预防和治疗坏血病、促进胶原的形成和类固醇的代谢、抗衰老、防癌抗癌等作用。维生素K具有防止新生婴儿出血疾病、预防内出血及痔疮、促进血液正常凝固等生理作用。

因此，维生素作为营养强化剂已经在食品工业的部分产品中开始使用，测定食品中维生素的含量，不仅可以评价食品的营养价值，而且还可以监督维生素作为营养强化剂的剂量，以防止摄入量过多引起中毒反应。

近两年，食品安全国家标准相继更新了食品中维生素B12、B6、K2和维生素D的测定方法，上期已对维生素D在线柱切换反相液相色谱法进行了介绍，本期将重点介绍维生素B1、B2、B6、B12、C、K1、K2的解决方案。

仪器配置

仪器

Chromai Leaps高效液相色谱系统

Leaps四元泵（P40）

Leaps标准型自动进样器（带制冷）（A10C）

Leaps 标准加热型柱温箱（C10）

Leaps紫外-可见检测器（D10）或Leaps荧光检测器（FL）

色谱柱

维生素B1/K1：Chromai Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）(货号：3.1.04.0009)

维生素B2/B6/K2：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 5 μm）（货号：3.1.04.0008）

维生素B12：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 3 μm）（货号：Y.1.01732）

维生素C：Chromai Lotus Polar C18（4.6*250 mm, 5 μm）（货号：Y.1.01684）

实验结果和讨论

标准溶液色谱图

参考标准方法中所列色谱条件，得到各种维生素标准溶液谱图，如图1所示。

维生素B1

维生素B2

维生素B6

维生素B12

维生素C

维生素K1

维生素K2

图1 维生素标准溶液色谱图

线性范围及检出限

将不同浓度的系列标准工作溶液分别进样，得到并绘制标准曲线，在线性范围内，线性相关系数均大于0.999。

根据信噪比数据得到各化合物的检出限，符合相应标准要求。

表1 线性范围及检出限

化合物名称		线性范围	标准曲线方程	R2	检出限
维生素B1		0.05~1.0 μg/mL	y=2.705x+0.0021	0.9999	0.8 μg/100g
维生素B2		0.02~1.0 μg/mL	y=17,571,699.20x- 27,372.52	0.9999	0.1 μg/100g
维生素B6	吡哆醛	0.015~1.0 μg/mL	y=17,226,383.79x- 66,845.44	0.9999	0.005 mg/kg
	吡哆醇	0.015~1.0 μg/mL	y=24,064,833.66x- 253,157.10	0.9996	0.005 mg/kg
	吡哆胺	0.015~1.0 μg/mL	y=16,244,871.61x- 117,154.16	0.9999	0.02 mg/kg
维生素B12		30~200 ng/mL	y=0.0866x-0.0816	0.9999	0.2 μg/100g
维生素 C	L(+)-抗坏血酸	0.5~50.0 μg/mL	y=56.67047x+0.34317	0.9998	固体 0.016 mg/100g 液体 0.003 mg/100g
维生素 C	D(-)-抗坏血酸	0.5~50.0 μg/mL	y=54.99530x-6.29638	0.9999	固体 0.067 mg/100g 液体 0.013 mg/100g
维生素 K1		10~400 ng/mL	y=0.02110x+0.00348	0.9999	1.5 μg/100g
维生素 K2	四烯甲萘醌（MK-4)	0.025~1.0 μg/mL	y=5.19057x-0.01373	0.9999	5.6 μg/kg
	七烯甲萘醌（MK-7)	0.025~1.0 μg/mL	y=3.48727x-0.01573	0.9998	14 μg/kg
	九烯甲萘醌（MK-9)	0.05~1.0 μg/mL	y=2.69603x-0.01425	0.9995	40 μg/kg

系统精密度

对一定浓度的样品溶液，连续进样六针考察仪器系统的精密度，结果见表2。

在Chromai Leaps高效液相色谱系统中，除维生素C外，保留时间RSD均小于0.1%，峰面积RSD均小于0.4%，系统精密度结果优异，满足食品中维生素含量测定的定量要求。

表2 连续六针进样精密度结果

化合物名称		保留时间 RSD%	峰面积 RSD%
维生素B1		0.06%	0.15%
维生素B2		0.10%	0.28%
维生素B6	吡哆醛	0.01%	0.11%
	吡哆醇	0.01%	0.11%
	吡哆胺	0.02%	0.13%
维生素B12		0.10%	0.13%
维生素C	L(+)-抗坏血酸	0.12%	0.48%
	D(-)-抗坏血酸	0.15%	0.54%
维生素K1		0.03%	0.14%
维生素K2	四烯甲萘醌（MK-4)	0.02%	0.04%
	七烯甲萘醌（MK-7)	0.01%	0.32%
	九烯甲萘醌（MK-9)	0.01%	0.32%

结论

采用Chromai Leaps高效液相色谱系统，搭配紫外检测器或荧光检测器，进行食品中各种维生素含量的测定，在对应的食品安全国家标准规定的线性范围内，线性相关系数均大于0.999，检出限结果优于标准中规定的要求，并且连续六针进样的系统精密度结果优异，符合维生素含量测定的定量要求。

参考文献

[1] GB 5009.84-2016《食品安全国家标准食品中维生素B1的测定》第一法高效液相色谱法

[2] GB 5009.85-2016《食品安全国家标准食品中维生素B2的测定》第一法高效液相色谱法

[3] GB 5009.154-2023《食品安全国家标准食品中维生素B6的测定》第三法高效液相色谱-荧光检测法

[4] GB 5009.285-2022《食品安全国家标准食品中维生素B12的测定》第一法液相色谱法

[5] GB 5009.86-2016《食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定》第一法高效液相色谱法

[6] GB 5009.158-2016《食品安全国家标准食品中维生素K1的测定》第一法高效液相色谱-荧光检测法

[7] GB 5009.290-2023《食品安全国家标准食品中维生素K2的测定》

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