高纯度RNase A纯化工艺方案分享

核糖核酸酶A（Ribonuclease A，缩写RNase A），是一种含4个二硫键的单链多肽，分子量约为13.7kDa（氨基酸序列）。RNase A是一种核糖核酸内切酶（endoribonuclease）。

我们基本采用牛胰腺硫酸铵盐析粗提物（由McDonald根据Kunitz氏纯化方法修改，“Methods in Enzymology”，Vol.ⅡP429，1955.）。

我们使用CM Tanrose 6FF为层析介质。这是月旭科技研发的一款高流速琼脂糖基架弱阳离子交换介质填料。以6%高度交联的琼脂糖为基架的介质，平均粒径及粒径范围分别为90μm，45-165μm，具有流速快、分辨率高的优点，是大规模生物分子分离纯化的首选介质。洗脱后的核糖核酸酶A纯度可提升至71~86%，并通过进一步去杂后，最终纯度大于95%，最终收率约56%。

层析柱填料：CM Tanrose 6FF（货号：00062-53002）。

样品：牛胰腺粗品（含多种杂蛋白）。

程序运行：

缓冲液B，3CV，2.5mL/min

↓

缓冲液A平衡，13CV，2.5mL/min

↓

上样环上样，2.5mL/min

↓

缓冲液A洗杂，8CV，2.5mL/min

↓

缓冲液B线性梯度洗脱，0-40%B，10CV， 2.5mL/min

对层析上样液，洗脱液进行SDS-PAGE电泳跑胶，通过凝胶成像仪分析。

图1：核糖核酸酶A经离子交换层析纯化图谱

图2：层析柱上样液

图3：层析柱洗脱液

图4：经后续纯化处理后

样品经层析纯化后，通过SDS-PAGE数据分析可知：经一步层析纯度提升至82.4%，显示了填料的高分辨率。

通过对牛胰腺盐析粗提物处理，上样CM Tanrose 6FF进行RNase A的分离纯化，其纯度得到了很大的提升，去除了较多的杂蛋白，经后续一定的处理后，跑SDS-PAGE胶，凝胶成像仪分析显示单一条带，符合纯化要求。

作者：余新勇

排版：吴梦琳

审核：栾建明

中国领先的色谱填料、色谱耗材和仪器制造商

色谱分析和分离纯化整体解决方案供应商

色谱实验用品一站式供应商

企业·使命

企业·精神

企业·理念

企业·价值观