【应用速递】使用XBridge Premier BEH Amide开发17种游离氨基酸的HILIC-MS方法

LC系统：

ACQUITY UPLC H-Class Plus + 柱管理器 + QDa

检测器：

MS全扫（ESI+）

色谱柱：

XBridge Premier BEH Amide 2.1 x 50 mm,2.5 μm (p/n:186009928)

Atlantis Premier BEH Z-HILIC 2.1 x 50mm, 2.5 μm (p/n:186009985)

CORTECS HILIC 2.1 x 50 mm 2.7 μm(p/n:186007380)

柱温：

30 °C

进样量：

1.0 μL

流速：

0.15 mL/min

流动相A：

水

流动相B：

乙腈

流动相D1：

200 mM甲酸铵，pH 3.0

流动相D6：

200 mM乙酸铵，pH 9.0

梯度：

结果与讨论

01.

pH对分离效果的影响

在pH 9.0时，异亮氨酸与亮氨酸未实现分离；在pH 3.0时，Premeir BEH Amdie的整体峰形及分离效果更佳。

02.

梯度调整

注意保持盐浓度恒定。

03.

缓冲盐浓度

使用缓冲盐梯度，可避免缓冲盐在高比例有机相中析出的潜在问题，又通过影响离子相互作用来解决峰形或选择性问题。

*为丙氨酸

结果：

通过考察色谱柱、流动相、梯度等条件，最终得到17种氨基酸的分离条件，可实现异亮氨酸与亮氨酸的基线分离。