应用分享︱采用TSKgel Amide-80色谱柱液质联用法分析珍珠粉中氨基酸

2023-08-12 13:59:14 东曹（上海）生物科技有限公司

珍珠为珍珠贝科动物马氏珍珠贝等双壳类受刺激形成。珍珠粉含有多种活性成分，包括氨基酸类、牛磺酸、小分子活性肽等活性成分，具有安神定惊、明目消翳、解毒生肌、润肤祛斑等功效。中国是珍珠的主要生产国之一，淡水珍珠养殖产业繁茂，但缺乏规范性管理，产销分离，且珍珠常作为保健产品，需求量大，所以市场上常有以次充好，以假乱真的现象。

本次分享的应用中，作者采用了HILIC色谱柱TSKgel Amide-80的液质联用技术( HPLC-MS/MS) 对不同来源珍珠粉中氨基酸类成分含量进行测定和质量评价。

分析条件

色谱柱：TSKgel Amide-80 (2.0mmI.D.×15cm, 3μm)

流动相A：0.2 %甲酸水溶液

流动相B：乙腈

梯度：0~3/5 min, 60%~80%B; 3.5~4.5 min, 80% B; 4.5~4.6 min, 80%~60% B; 4.6~6.1 min, 60%B

流速：0.2 mL/min

柱温：40℃

进样量：2 μL

质谱条件：正离子, 多反应检测 (MRM), 气帘: 241.32 kPa, 离子化温度: 550 ℃, 喷雾电压: 5500 V

测定方法

以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立回归方程。得到14个氨基酸的线性关系，线性相关系数R范围为：0.9964~1.0000，以3倍信噪比确定方法的检测限范围为：0.0010~0.0228 μg/mL，以10倍信噪比确定为方法的定量限范围为：0.0032~0.0560 μg/mL。平行制备6份供试品溶液计算得到14个氨基酸峰面积的RSD为：1.53%~2.82%，表明该方法重复性良好。

14个氨基酸对照品溶液 (400 ng/mL) 的HPLC-MS/MS (MRM) 色谱图

1. Pro 2. Asp 3. Phe 4. Thr 5. Leu 6. Tyr 7. Ser 8. Val 9.Gly 10.Ala 11. His 12. Lys 13. Glu 14. Arg

结果与讨论

采用TSKgel Amide-80色谱柱液质联用法测定珍珠粉中的氨基酸，可在10 min内完成分离与测定，该方法操作简单、无需衍生化等繁琐操作，快速、线性关系良好，具有较好的重现性和准确度，可以用于珍珠粉中氨基酸类成分的测定及质量评价。

参考文献

[1] 王姣姣，徐迪辉，周婧马宏跃, 王恒斌，狄留庆，段金廒, 等. 不同来源珍珠粉中氨基酸类成分的HPLC-ESI-MS/MS分析与评价[J]. 中药材, 2021, 44(7)：1668-1674.

[2] Zhang JX, Li SR, Yao S, et al. Ultra-performance liquid chromatography of amino acids for the quality assessment of pearl powder [J].J Sep Sci,2015, 38(9): 1552-1560

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京：中国医药科技出版社，2020：242-243.